[发明专利]一种促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物合成的方法

说明书

本方案公开了植物细胞培养技术领域一种促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物合成的方法，精确称取白及愈伤组织，将其加入到MS+1.0mg/L 6‑BA+3.0mg/L 2,4‑D的液体培养基中，再向培养基中加入蔗糖进行悬浮培养；所述液体培养基的pH值为5.85～6.05，液体培养基的体积为21.74～40.13mL，白及愈伤组织的添加量为0.82～1.40g，液体培养基中蔗糖的浓度为28.77～38.32g/L，培养温度为20℃～25℃，培养环境为暗培养，悬浮培养的时间为30～40d。在本发明的培养条件下培养得到的白及悬浮培养细胞中，对羟基苯甲醇、dactylorhin A、militarine和coelonin的累积量均能够明显的增加。

技术领域

本发明涉及植物细胞培养技术领域，具体涉及一种促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物合成的方法。

背景技术

白及(Bletilla striata(Thunb.)Rchb.f.)亦称白芨，是我国传统的名贵中草药。白及以干燥块茎入药：苦﹑甘﹑涩﹑微寒；收敛止血，消肿生肌；可用于咳血吐血，外伤出血，肺痨咳血，溃疡出血，是止血良药。近年来对其化学成分及药理研究表明白及药材中的多种次生代谢产物成分，如联苄类、二氢菲类、菲类、联菲类、醌类衍生物等化合物，具体的成分包括对羟基苯甲醇、1,4～二[4～(葡萄糖氧)苄基]～2～异丁基苹果酸酯～2～葡糖苷(英文名：dactylorhin A)、1,4～二[4～(葡萄糖氧)苄基]～2～异丁基苹果酸酯(英文名：militarine)、2,7～二羟基～4～甲氧基～9,10～二氢菲(英文名：coelonin)，这些化合物都具有抗流感病毒、抗肿瘤、保护胃粘膜等药理活性。

对羟基苯甲醇，结构式为：

dactylorhin A，结构式为：

militarine，结构式为：

coelonin，结构式为：

目前已有文献报道成功建立了白及细胞液体悬浮培养体系，但如何通过调控悬浮培养体现来促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物累积，却鲜有研究报道。若能够使白及悬浮培养细胞中次生代谢产物累积量达到最大值，对于中药材白及的现代化发展具有较高的实用价值。

发明内容

本发明意在提供一种促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物合成的方法，以使得白及悬浮培养细胞中次生代谢产物累积量增加，提升白及药材的使用价值。

本方案中的一种促进白及悬浮培养细胞中次生代谢产物合成的方法，精确称取白及愈伤组织，将其加入到MS+1.0mg/L 6-BA+3.0mg/L 2,4-D的液体培养基中，再向培养基中加入蔗糖进行悬浮培养；

所述液体培养基的pH值为5.85～6.05，液体培养基的体积为21.74～40.13mL，白及愈伤组织的添加量为0.82～1.40g，液体培养基中蔗糖的浓度为28.77～38.32g/L，培养温度为20℃～25℃，培养环境为暗培养，悬浮培养的时间为30～40d。

本方案的有益技术效果是：

在本发明的培养条件下培养得到的白及悬浮培养细胞中，对羟基苯甲醇、dactylorhin A、militarine和coelonin的累积量均能够明显的增加。