[发明专利]6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱及其构建方法与应用

说明书

本发明公开6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱，6个怀远石榴优良品种分别为：白玉石籽、大笨子、红粉皮、红玉石籽、玛瑙籽、晶花玉石籽；SSR指纹图谱是基于8对SSR引物构建的指纹图谱，8对SSR引物分别为：PG080、PG130、PG139、PG152、PG098、PG077、PG090、PG093，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1‑16所示，构建的6个品种的SSR指纹图谱特征如表1所示。本发明还公开了其构建方法及其应用。本发明为6个石榴品种的真伪鉴定、育种利用和新品种权利保护提供了理论依据。

技术领域

本发明涉及分子标记技术领域，具体涉及6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱及其构建方法与应用。

背景技术

石榴是古老的保健水果，果实富含花青苷、黄酮、安石榴苷等多酚类物质，特别是安石榴苷等鞣花单宁类物质临床医用和保健价值高，具有潜在的抗氧化、抗癌、抗菌等功能，被誉为超级水果，被划为国家规划特色经济林树种之一。据记载，石榴在我国已有2000多年的栽培历史，在长期的栽培过程中，形成了众多具有地方特色的优良石榴品种。安徽怀远是我国四大传统石榴产区之一，玉石籽、玛瑙籽等优良品种闻名遐迩。怀远石榴籽粒晶莹剔透、风味醇厚，深受消费者青睐。

石榴是多年生果树，对石榴优良品种的保存主要采取无性繁殖的方法。由于石榴独特的经济、生态效应，近年来石榴产业快速发展，在我国果树产业结构调整中发挥了重要的作用。石榴在不同地域间引种和品种交换频繁，常常导致品种混杂，同物异名或同名异物现象严重，对石榴品种资源的保存、鉴定与利用都十分不利，对杂交育种中亲本的选配及系谱分析也有不利影响。生产中，品种纯正是保证高效栽培的条件。因此明确品种的指纹图谱，对石榴资源的保存、鉴定及利用均有重要的现实意义。分子标记可以直接检测不同品种或个体在DNA分子水平上的差异，具有较高的多态性和个体特异性，且不受环境和生长阶段影响，能鉴定形态标记所难以鉴定的个体。因此，开发可靠的分子标记并构建石榴指纹图谱，对石榴快速鉴定具有重要意义。

白玉石籽、大笨子、红粉皮、红玉石籽、玛瑙籽、晶花玉石籽是安徽怀远的6个优良的主栽石榴品种，由于其性状优良，商品价值高，在苗木生产、果品销售以及引种过程中常有以次充好现象存在，因此建立这6个优良石榴品种的指纹图谱，对科学合理利用这些品种具有重要的意义。

发明内容

本发明第一方面提供了6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱，6个怀远石榴优良品种分别为：白玉石籽、大笨子、红粉皮、红玉石籽、玛瑙籽、晶花玉石籽；

SSR指纹图谱是基于8对SSR引物构建的指纹图谱，8对SSR引物分别为：PG080、PG130、PG139、PG152、PG098、PG077、PG090、PG093，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO.1-16所示；

利用该8对引物构建的6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱特征如表1所示：

表1 6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱

本发明第二方面提供了上述6个怀远石榴优良品种的SSR指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：

(1)采用CTAB法提取DNA，加入50μL 0.1M的TE缓冲液，溶解过夜，-20℃保存备用；

(2)采用8对引物，以提取DNA为模版，进行PCR扩增，PCR扩增采用20μL的反应体系，含1.0ng DNA，0.4μM正向引物，0.4μM反向引物，4mM MgCl₂，400μM dNTPs，1.0U Taq-DNA酶，加ddH₂0至总体积20μL，PCR采用touchdown反应，反应条件如下：5min，95℃；接下来11个循环，每个循环后退火温度下降0.8℃{30s，95℃；30s，65℃；50s，72℃}；22个循环{30s，95℃；30s，55℃；50s，72℃}；最后72℃延伸8min；