[发明专利]一种抗白念珠菌生物被膜植物提取物及其制备方法

说明书

本发明属于医药技术领域，公开了宽叶金粟兰提取物的一种新用途，具体为在拮抗白念珠菌生物被膜形成方面的应用。本发明通过CFU计数法研究了宽叶金粟兰提取物对白念珠菌生物被膜形成的干预作用。实验结果发现宽叶金粟兰提取物对白念珠菌生物被膜的形成具有显著的抑制作用。本发明为由白念珠菌生物被膜引起的相关真菌感染提供了一种潜在的预防途径。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种植物提取物的制备方法和应用，具体涉及宽叶金粟兰甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物的制备方法以及抗白念珠菌生物被膜的应用。

背景技术

白色念珠菌(Candida albicans)是一种重要的条件致病性真菌，可感染人体的各个器官和组织，AIDS患者、器官移植患者、化疗中的癌症患者以及植入医疗器械装置的患者尤为敏感，具有较高的致病率和致死率。白色念珠菌可在植入体或人体组织表面形成生物被膜(biofilms)，具有更强的抵抗药物能力、感染能力及复原能力，与临床耐药密切关系，与浮游细胞(planktonic cells)相比，生物被膜细胞对药物的耐药性可高达1000倍。另生物被膜可形成休眠的滞留菌(persisters)，是真菌细胞对药物表现为高度耐受，而酵母态的白念珠菌细胞不能形成滞留菌。因此，开展有关抗真菌生物被膜作用成分的提取和研究对于真菌感染疾病具有重要的意义。

金粟兰属植物多具有抗菌消炎的功效，随着其近缘植物草珊瑚被开发为草珊瑚含片、肿节风注射液等，该属植物的化学和生物学意义的研究越来越多，日益得到人们的重视。本发明研究发现宽叶金粟兰(Chloranthus henryi)全草甲醇提取物的乙酸乙酯萃取部位具有较强的抑制白念珠菌生物被膜的活性，具有抗真菌感染的用途。

发明内容

本发明的目的在于公开了抗白念珠菌生物被膜的宽叶金粟兰植物提取物制备方法，该方法操作方便。

本发明进一步公开了宽叶金粟兰植物提取物抗白念珠菌生物被膜活性，本发明涉及的具有抗白念珠菌生物被膜作用的宽叶金粟兰提取物为首次发现其一直生物被膜形成的活性。

本发明提供的植物提取物可用于制备拮抗白念珠菌生物被膜感染的药物。

附图说明

图1为宽叶金粟兰提取物对白念珠菌生物被膜形成的抑制活性。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，但并不因此而限制本发明。

实施例一：宽叶金粟兰提取物的制备

1.干燥的宽叶金粟兰(Chloranthus henryi)全草8kg经甲醇回流提取3次，每次回流提取2小时，减压浓缩提取液得甲醇浸膏。

2.甲醇浸膏悬浮于1500ml蒸馏水中，以等体积乙酸乙酯溶剂萃取4次，合并后减压浓缩萃取液，得乙酸乙酯萃取部位640g。

实施例二：宽叶金粟兰提取物抗白念珠菌生物被膜活性

1.实验菌株：C.albicans YEM 30由美国Northeastern University惠赠。

2.实验方法：将白念珠菌悬浮于RPMI 1640培养基中，得1×10⁶CFU/mL的真菌悬浮液(O.D.≈0.1)。取100μl该真菌悬浮液置于96孔板中，同时添加或未加一系列浓度的宽叶金粟兰植物提取物DMSO溶液于相应的培养板孔中(DMSO终浓度1％)。96孔板于37℃振荡培养，孵育24h后，弃去培养液，以PBS(phosphate-buffered saline)缓冲液清洗三遍，对白念珠菌的形态进行观察。观察后将生物被膜刮下后，振荡30s，然后在RPMI-1640中梯度稀释(10倍稀释)，取系列稀释液滴在YEPD板上，于35℃培养48h后计CFU数。实验重复4次，取其平均值。

3.实验结果：测试了浓度分别为0.125mg/ml、0.25mg/ml和0.5mg/ml宽叶金粟兰植物提取物对白念珠菌生物被膜的抑制活性。结果显示植物提取物具有显著抗生物被膜的效应，以上浓度对应的抑制强度分别为76％、82％和97％，抑制活性与剂量存在依赖关系，其IC₅₀值为73.6μg/ml。