[发明专利]丝胶蛋白/纳米羟基磷灰石组织工程骨移植物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种含生长因子的组织工程骨移植物，包括复合支架材料和生长在所述复合支架材料上的生长因子，其特征在于，所述的复合支架材料包括通过交联剂交联的丝胶蛋白和纳米羟基磷灰石的复合物；

以所述的复合支架材料的总重计，丝胶蛋白的含量为20-80重量%，纳米羟基磷灰石的重量为20-80重量%，丝胶蛋白与交联剂的重量比为0.01-100:1；所述生长因子与丝胶蛋白的重量比为0.01-1:1；

所述纳米羟基磷灰石的孔隙直径为100-250μm、孔隙率为90%以上，并且孔隙为连通孔隙；

所述丝胶蛋白分子量为50 kDa-250kDa；

所述生长因子与复合支架材料构成具有三维空间结构和生物活性的细胞载体复合物，其中，所述复合支架材料呈多孔状，孔的形状主要为圆形，复合支架材料的孔与孔之间相互贯通使得所述复合支架材料形成连通空隙；

所述生长因子由所述丝胶蛋白包裹；

所述骨移植物还包括种子细胞，所述种子细胞粘附在所述复合支架材料上，所述种子细胞为骨髓间充质干细胞，所述种子细胞密度为1×10⁶-5×10⁶个/ml，所述骨髓间充质干细胞为经分离、扩增经体外传代为第3代的骨髓间充质干细胞；

所述的丝胶蛋白为从丝素缺失突变型家蚕185 N-ds蚕种提取的天然结构未破坏的丝胶蛋白；

所述交联剂为辣根过氧化物酶和H₂O₂的混合物、戊二醛和京尼平中的一种或多种；

所述生长因子为rhBMP2。

2.一种制备权利要求1所述的组织工程骨移植物的方法，其特征在于，该方法包括：

配置含有生长因子和丝胶蛋白的溶液，然后在交联剂存在下与纳米羟基磷灰石的悬浮液混合得到混合溶液；将混合溶液注入模型进行冷冻、干燥；

所述的丝胶蛋白采用低温LiBr法制备，包括如下步骤：

将蚕茧剪碎，浸于LiBr水溶液中进行裂解，然后将裂解的丝胶液进行纯化，可选择地进行对所述丝胶液进行提浓或降浓，得到所需浓度的丝胶蛋白溶液；

所述纳米羟基磷灰石采用溶胶-絮凝法制备，包括如下步骤：

在碱性水溶液条件下，可选地在分散剂存在下，将硝酸钙与磷酸铵接触沉淀，将得到的沉淀物进行干燥，烧结得到100nm以下粒径的纳米羟基磷灰石；

所述裂解的条件包括：LiBr水溶液的浓度为4-12 M，温度为25-40℃，时间为12-36h，所述蚕茧为185 Nd-s蚕茧；

所述纯化的步骤包括：在室温下，用超纯水进行透析；

所述丝胶蛋白溶液的浓度为1-10重量%；

交联剂源为辣根过氧化物酶和双氧水的混合物、戊二醛和京尼平中的一种或多种；

丝胶蛋白溶液与交联剂的体积比为100:1-50。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述的交联剂源为辣根过氧化物酶和双氧水的混合物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述辣根过氧化物酶与双氧水的用量体积比为1-10:1。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述的方法，其中，该方法还包括：冷冻、干燥结束后进行负压抽吸负载种子细胞，包括如下步骤：

（1）将干燥材料进行预湿培养得到预湿支架；

（2）将种子细胞均匀加入预湿支架，然后置于真空负压抽吸器中抽吸保持负压培养。

6.权利要求1所述的组织工程骨移植物或权利要求2-5中任意一项制备方法制备得到的组织工程骨移植物作为仿生人工骨在骨科材料中的应用。