[发明专利]一种核酸片段分选纯化试剂及方法

说明书

本发明公开了一种核酸片段分选纯化试剂及方法，该试剂包括磁珠结合液、洗涤液、洗脱液，可用于对混合物样本中不同区段靶向核酸片段的分选、纯化，所述靶向核酸片段分选步骤如下：将含不同区段的第一核酸混合物与磁珠结合液混匀，室温放置后，再置于磁力架上静置，弃上清液，洗涤、洗脱；所述的第一核酸混合物与磁珠结合液的体积混合比为1:1.2‑0.45。此外还可根据需要选择是否进行第二步分选，即取第一核酸混合物与磁珠结合分离后的上清液作为第二核酸混合物，再次进行结合分离、洗涤、洗脱；可通过调整加入的磁珠结合液的体积分选不同区段的靶向核酸片段。本发明提供的试剂及方法可用于下游的核酸片段分析及二代测序平台文库构建等。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及一种核酸片段分选纯化试剂及方法。

背景技术

英国生物化学家Sanger发明了双氧终止DNA测序法，极大推动了基因测序发展的行业前景，随后逐渐出现第二代测序技术和第三代测序技术，这两种技术一般统称为下一代测序技术(NGS)，下一代测序的应用范围较广，如下几个面：1、Denovo测序、重测序及其他DNA测序；2、RNA测序；3、宏基因组测序；4、表观遗传学。而下一代测序需要的核酸模板不论从质量还是数量都有一定的要求，且核酸模板的片段大小对减小测序误差有着重要的意义。

核酸的分离与纯化技术是分子生物行业的一项基础技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域，核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展。在分离纯化中将目标核酸与样品中其他组分分离，例如蛋白质污染物或者其他核酸，通常也称为非靶核酸。而对于某些应用而言，片段大小的差异是区分靶核酸与非靶核酸的重要依据。

目前可以分选不同大小片段的靶核酸的方法有两种，一种采用切胶回收，但其实验方法操作繁琐，耗时长，紫外照射存在一定的危险性，并且易使核酸碱基发生突变。另一种方法在专利US6534262描述到利用聚乙二醇(PEG)和氯化钠来分离沉淀核酸，有效分选出目的核酸片段，但需要处理较长时间，操作复杂，而且核酸混合物中核酸含量较高时，才会有良好的回收效率。因此本发明的目的是提出一个快速，简单，回收率高，还能实现高通量的一种核酸片段分选纯化试剂及方法。

发明内容

为解决现有技术及方法的不足之处，本发明提出一种核酸片段分选纯化试剂及方法，是一种即快速又简单、回收率及纯度高，且能实现自动化移液工作站的高通量操作的分选试剂及方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种核酸片段分选纯化试剂，包含以下组分：磁珠结合液、洗涤液、洗脱液；

所述的磁珠结合液为含10-500mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸、0.5-2.5M盐酸胍、1-50％(W/V)且分子量范围为200-20000的聚乙二醇、1-50mM氯化锂、1-50mM氯化镁、0.5-25％(V/V)的无水乙醇及5-50mg/ml磁性颗粒；

洗脱液为无DNase与RNase酶无菌水或tris缓冲液或TE缓冲液。

进一步的，所述的聚乙二醇优选分子量为4000-10000，更优选为分子量10000。

进一步的，所述的磁性颗粒为表面包裹亲水性高分子介质并具有活性功能基团羟基的四氧化三铁颗粒，所述颗粒具有超顺性，且粒径为1-3um。

进一步的，所述磁珠结合液的pH为7-8。

进一步的，所述洗脱液的pH为7-8。

一种核酸片段分选纯化方法，基于上述的核酸片段分选纯化试剂实现。方法如下：将含不同区段的第一核酸混合物与磁珠结合液混匀，室温放置后，再置于磁力架上静置，弃上清液，用洗涤液洗涤磁性颗粒纯化核酸，再用洗脱液洗脱磁性颗粒上的核酸片段；所述的第一核酸混合物与磁珠结合液的体积混合比为1:1.2-0.45。