[发明专利]一种免疫细胞培养方法在审
| 申请号： | 201910614109.7 | 申请日： | 2019-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN111117956A | 公开（公告）日： | 2020-05-08 |
| 发明（设计）人： | 朱兵锐;刘朋程 | 申请（专利权）人： | 上海华颜医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 马云华 |
| 地址： | 200000 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 免疫 细胞培养 方法 | ||
1.一种免疫细胞培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)分离新鲜外周血的单核细胞和血浆；
(2)调整所述单核细胞至200万个/mL后接种于培养瓶中，预培养4d，得预培养体系；
(3)将所述预培养体系无菌注入细胞培养袋中；所述细胞培养袋的材质为FEP；
(4)将细胞培养基注入培养基保存袋中，利用联通管将所述细胞培养袋和培养基保存袋进行连接，所述联通管上设置有可拆卸的三通止流阀；所述培养基保存袋的材质为PVC；
(5)将所述细胞培养袋置于培养箱中进行培养，所述培养箱内设置温度为37℃，CO2浓度为5％；将所述培养基保存袋置于4℃冰箱内；
(6)利用所述三通止流阀将所述培养基保存袋中的细胞培养基转移至所述细胞培养袋中，所述转移的频率为1～2d/次。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)所述分离包括离心和ficoll法分离。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)所述细胞培养袋上开设有取样口和进样口。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)所述细胞培养袋的容积为2L。
5.根据权利要求3或4所述方法，其特征在于，所述无菌注入的方法包括：在无菌操作台上，取一个50mL注射器，去掉推塞后，悬挂于支架上，同时利用软管将注射器的套筒与细胞培养袋的进样口连接，然后注入所述预培养体系。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(4)所述培养基保存袋为2个，每个培养基保存袋的容积均为650mL。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(5)所述培养的时间为10d。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，在所述培养过程中，培养到第6d进行一次细菌检测。
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