[发明专利]一种基因改造表达改造型PLA2R受体的细胞及其应用

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种基因改造表达PLA2R受体的细胞及其应用。本发明目的在于提供一种基因改造的表达改造型PLA2受体的细胞。本发明另一个目的在于提供前一目的细胞的应用。本发明为了实现前述目的，本发明对人PLA2R基因进行了突变处理。为了更好的实现前述目的，本发明利用蛋白的糖基化修饰导致蛋白糖链结构发生改变，从而蛋白的功能性表位发生了变化，突变导致去糖基化修饰的PLA2R蛋白，通过检测去糖基化修饰PLA2R的CHO细胞，可见细胞表面存在大量表达的去糖基化的PLA2R，利用该细胞膜碎片进行包被，然后进行酶联检测，结果显示敏感性97%，特异性100%。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种基因改造表达PLA2R受体的细胞及其应用。

背景技术

膜性肾小球肾炎（membranous glomerulonephritis），又称为膜性肾病（membranous nephropathy，MN），是导致成人肾病综合征的常见病因之一，约占原发性肾小球肾炎的10%。儿童发病率低，大多为继发性MN。本病光镜和电镜下病理特点为上皮下免疫复合物沉积及基底膜增厚。原发性MN的免疫复合物只分布于毛细血管襻而不分布在系膜区，一般无内皮、系膜或上皮细胞增生。继发性MN的免疫复合物除分布于毛细血管襻外，还可分布在系膜区。因此，电镜下见到系膜区有电子致密物沉积，往往提示继发性MN。成人肾病综合征者，特别是年龄在35岁以上，隐匿起病、病情发展缓慢者要考虑本病的可能性。确诊需靠肾活检病理诊断，早期病变光镜下肾小球可正常，易误诊为微小病变型肾病，此时电镜和免疫荧光检查尤其重要。活检会给患者带来巨大的痛苦，因为多种现在研究表明，抗PLA2R相关表位的抗体与原发性膜性肾小球肾炎具有良好的相关性，特异性与敏感度均可达到80%以上，为了更好的实现利用抗PLA2R相关表位的抗体检测达到减少临床患者痛苦，以及提高抗PLA2R相关表位的抗体检出的特异性与敏感度，发明人进行了以下内容的发明。

发明内容

本发明目的在于提供一种基因改造的表达改造型PLA2受体的细胞。

本发明另一个目的在于提供前一目的细胞的应用。

本发明为了实现前述目的，本发明对人PLA2R基因进行了突变处理，具体序列见序列1：PLA2R，具体突变部分序列2：突变糖基化区域，相对应于序列1：PLA2R中4191-4392。为了更好的实现前述目的，本发明利用蛋白的糖基化修饰导致蛋白糖链结构发生改变，从而蛋白的功能性表位发生了变化，突变导致去糖基化修饰的PLA2R蛋白，通过检测去糖基化修饰PLA2R的CHO细胞，可见细胞表面存在大量表达的去糖基化的PLA2R，利用该细胞膜碎片进行包被，然后进行酶联检测，结果显示敏感性97%，特异性 100%。本发明实施例中采用CHO细胞株进行了验证，另外本发明也使用293细胞进行验证，同样可以实现本发明。

本发明另外建立了一种外分泌性sPLA2R基因突变型，具体序列见序列4：序列4：sPLA2R。经过检测，基因突变改造后的sPLA2R分泌量大量提高