[发明专利]基于NiFe2

权利要求书

1.一种基于NiFe₂O₄纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光-温度免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依次用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；

（2）将4 mg的扇形金红石TiO₂介晶（SUT）分散于1 mL浓度为10 mM的氨基离子液体（ILs）中，超声混合均匀，得到SUT-ILs复合物溶液，滴加3 μ L 所获得的SUT-ILs复合物溶液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得UST-ILs修饰电极；

（3）滴加3 μ L 1 wt.% 戊二醛于步骤（2）所制得的电极界面，室温下反应40 min；

（4）滴加3 μ L 浓度为100 ng/mL的脂解激活脂蛋白受体单克隆抗体（Ab₁）于步骤（3）制得的修饰电极介面，室温下孵育50 min，用去离子水洗去物理吸附，制得Ab₁/UST-ILs修饰电极；

（5）滴加 3 μ L 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤（4）修饰电极界面，室温下孵育40 min，封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，储存在4℃冰箱中备用；

（6）取100 μ L浓度为1.0×10^-2 M的 N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺（ABEI）和100 uL浓度为0.1 mg/mL的黑磷量子点（BPQDs），同时加入100 μ L 浓度为3 mg/mL的NiFe₂O₄纳米管溶液中，室温下振荡5 h,使ABEI和BPQDs吸附到NiFe₂O₄纳米管（NiFe₂O₄ NTs）表面，离心，洗涤，再分散制得NiFe₂O₄NTs@ABEI@BPQDs复合物溶液；随后，在1 wt.% 的戊二醛（GLD）的辅助作用下加入100 μ L浓度为100 μg/mL的HRP标记的山羊抗兔IgG (Ab₂)，室温下震荡50min，离心，洗涤，再分散制得NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs-Ab₂复合物溶液，然后向上述溶液中加入1wt.%的BSA溶液封闭非特异性吸附位点，保存在4℃冰箱中备用；

（7）将步骤（5）所制得的修饰电极浸入到不同浓度的脂解激活脂蛋白受体 (LSR）标准溶液中并在室温下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得LSR/Ab₁/UST-ILs修饰电极，并保存在4℃冰箱中备用；

(8) 取3 μ L步骤（6）制得的Ab₂-NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs-Ab₂复合物溶液于步骤（7）所制得的修饰电极界面，室温下孵育50 min，用去离子水冲洗电极表面,制得NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs-Ab₂/ LSR/Ab₁/UST-ILs修饰电极，并保存在4℃冰箱中备用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NiFe₂O₄纳米管由下述方法制备的：将4.8 g氯化铁，2.56 g 硝酸镍和4.4 g 对苯二甲酸加入到264 mL N,N-二甲基甲酰胺（DMF）溶液中形成混合液震荡20 min；随后，将56 mL 0.4 mol/L氢氧化钠溶液加入到上述混合液，待混合均匀后转至200 mL反应釜中，在124℃下加热48 h；冷却至室温后，用超纯水和乙醇离心、洗涤数次，最后，将所得产物在450℃下以1℃/ min煅烧8 h，自然冷却，得到产物NiFe₂O₄纳米管。