[发明专利]黑曲霉种子液的制备方法以及发酵制备柠檬酸的方法

权利要求书

1.一种黑曲霉种子液的制备方法，其特征在于，该方法包括将黑曲霉种子接种到种子培养基中进行培养，得到黑曲霉种子液；

其中，在所述培养的过程中流加营养物，所述营养物包含氮源和磷源。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，以摩尔量计，单位时间内所述氮源和磷源中氮元素和磷元素的流加量的比例为1-5:1。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，同时提供所述氮源和磷源的原料选自磷酸氢二铵、玉米浆、豆粕粉和玉米粉中的一种；和/或

单独提供所述氮源的原料选自氨水、硫酸铵、氯化铵和硝酸铵中的至少一种；和/或

单独提供所述磷源的原料选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸中的至少一种。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，该方法还包括：在流加所述营养物之前，向接种后的种子培养基中加入碱剂以调节种子培养基的pH至6-7；

优选地，当所述种子培养基的溶氧值在90％以上时停止加入所述碱剂；

优选地，所述碱剂为氨水或氢氧化钠，更优选为氨水。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，该方法还包括：在停止加入所述碱剂之后，流加所述营养物，在所述营养物流加的过程中，控制所述种子培养基的pH为4.5-5。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中，当所述培养的过程中，黑曲霉的耗氧速率在40以上时，停止流加所述营养物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法还包括：将黑曲霉种子接种到种子培养液中进行培养之前，将所述黑曲霉种子加入无菌水中进行分散处理，制成黑曲霉孢子悬浮液；

优选地，所述分散处理的温度为30-37℃，pH为6-7，时间为2-8h。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述黑曲霉孢子悬浮液中黑曲霉孢子的含量为1×10⁷-9×10⁹个孢子/ml。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述种子培养基包含淀粉质原料酶解液化液、硫酸铵和磷酸氢二钾；

其中，所述种子培养基中的总糖含量为5-20重量％；以总糖干重计，所述硫酸铵的含量为0.6-1重量％，所述磷酸氢二钾的含量为0.2-0.5重量％。

10.一种发酵制备柠檬酸的方法，该方法包括：在能够生成柠檬酸的条件下，将通过权利要求1-9中任意一项所述的黑曲霉种子液的制备方法得到的黑曲霉种子液接种至发酵培养基中进行发酵，得到发酵液。