[发明专利]一种地衣芽孢杆菌发酵培养工艺

权利要求书

1.一种地衣芽孢杆菌发酵培养工艺，其特征在于，所述发酵培养工艺包括种子罐培养阶段和发酵罐培养阶段；

采用的菌种为地衣芽孢杆菌ACCC10146；

A.种子罐培养

采用100升种子罐：

种子罐培养采用的培养基为：玉米粉11g/L、豆粕23g/L、葡萄糖4.6g/L、磷酸氢二钾1.7g/L、磷酸二氢钾1.3g/L、硫酸镁0.8g/L和硫酸锰0.5g/L；

a.种子罐检查无误后，加入适量的水，投入玉米粉和豆粕，用夹套将种子罐内升温至47-49℃，再加入蛋白酶液化一个小时，然后加入中温淀粉酶，升温至68-70℃再液化一个小时；

蛋白酶的加入量为12g，中温淀粉酶的加入量为7g；

b.液化完毕，加入剩余的培养基和消泡剂，开启三路进气，注意进排汽稳定，升温至121-122℃实消灭菌30分钟，消后体积70升，消后pH控制在6.7-6.8；所述消泡剂为：二甲基硅油，加入量为10g；

c.接种

实消结束后，种子罐保压降温，当温度降至培养温度37±0.5℃时准备接种；

接种前准备好酒精棉、钳子、镊子和接种环；将棉花均匀放置到接种环周围，接种环放置到接种口后点火，要求火焰封闭接种口周围；

关闭接种瓶与种子罐之间的阀门，缓慢打开接种口盖，打开后接种口盖不得离开火焰封闭范围；

将种子瓶口在火焰中灼烧后，在火焰封闭范围内打开棉塞，迅速将种子液倒入接种瓶内；在火焰范围内将种子瓶棉塞塞入瓶口后移出接种火焰，接种结束后，将接种口盖关闭；

打开接种瓶和种子罐之间的阀门，使种子自然流入种子罐后，扑灭火焰，移走接种环；接种量100ml；通风、打开搅拌，正常培养；检测种子瓶无菌样；通风量为1：1，培养温度为37±0.5℃，搅拌速度为200转/分，培养时间为10-12小时，转种标准：细菌生长对数期时进行转种；

B.发酵罐培养

采用1000升发酵罐；

采用的发酵罐培养基为：玉米粉11g/L、豆粕23g/L、葡萄糖2.3g/L、甘露醇1.8 g/L、柠檬酸铁0.9 g/L、脯氨酸0.2 g/L、酪氨酸 0.2g/L、过磷酸钙1.1g/L、磷酸二氢钾1.3g/L、硫酸镁0.2g/L、硫胺素0.2 g/L和硫酸锰0.5g/L；

a.发酵罐检查无误后，加入适量的水，投入玉米粉和豆粕，用夹套升温至46-48℃，再加入蛋白酶液化一个小时，后加入中温淀粉酶升温至68-70℃再液化一个小时；蛋白酶的加入量为120g，中温淀粉酶的加入量为70g；

b.液化完毕，加入剩余的培养基和消泡剂，开启三路进气，注意进排汽稳定，升温至121-122℃实消灭菌30分钟，消后体积700升，消后pH控制在6.7-6.8；所述消泡剂为：二甲基硅油，加入量为100g；

c.转种

移种管道消毒：移种管道消毒压力0.2mPa，时间1小时；

转种时种子罐压力为0.15mPa ,发酵罐压力为0.05mPa；

d.发酵培养

通风量：前4小时通风量为1：1，4小时后通风量为1:1.2；发酵培养温度：37±0.5℃；搅拌速度：前4小时160转/分，4小时后180转/分；培养时间为30小时，细菌芽孢率99％以上时放罐；放罐处理：利用夹层升温，控制发酵罐内温度为50℃，维持20分钟，放罐，得到地衣芽孢杆菌；

经检测，地衣芽孢杆菌的芽孢率达到99.5%，芽孢形成一致；杂菌数为零；制备的地衣芽孢杆菌芽孢稳定性好，保质期长，保质期长达3年。