[发明专利]PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法

权利要求书

1.一种通过哺乳动物细胞表达PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法，其特征在于，所述的通过哺乳动物细胞表达PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法包括：

通过PD-L1抗原为哺乳动物细胞瞬时转染表达，使用生物素化方法筛选得到纳米抗体片段SEQ ID NO：1。

2.如权利要求1所述的通过哺乳动物细胞表达PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法，其特征在于，

纳米抗体片段SEQ ID NO：1DNA序列为：

CGGGGCGGGAACATTTCCAAGCTTAAGGAGACAGTACATATGAAATACCTATTGCCTACGGCAGCCGCTGGATTGTTATT

ACTCGCGGCCCAGCCGGCCATGGCCCAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGGCTGGGGGCTCTCTGA

GACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGACGCACCTTCAGAAACGATGTCATGGCCTGGTTCCGCCAGATTCCAGGGAAGGAGCGT

GAGTTTGTTGCGGTGATTGCCTACGATGCGGCTGACACAGACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCATCATCTCCAG

AGACAACGCCAAGAACACGATATATTTGCAAATGAACACCCTGAAACCTGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTGCAGCCG

ACAAGGACAGAATGTACGGTAGTAGGCACTGGCCGGAATATGAGTATGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTC

TCCTCAGCGGCCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGGTTCCCACCACCATCACCATCACTAGACTGTTGAAAGTTG

TTTAGCAAAACCTCATACAGAAAATTCATTTACTAACGTCTGGAAAGACGACAAAACTTTAGATCGTTACGCTAACTATG

AGGGCTGTCTGTGGAATGCTACAGGCGTTGTCGTTTGTACTGGTGACGAAACTCAGTGTTACGGTACATGGGTTCCTATT

GGGCTTGCTATCCCTGAAAATGAGGGTGGTGGCTCTGAGGGTGGCGGTTCTGAGGGTGGCGGTTCTGAGGGTGGCGGTAC

TAAACCTCCTGAGTACGGTGATACACCTATTCCGGGCTATACTTATATCAACCCTCTCGACAGCACTTATCCGCCTGGTA

CTGGAGCAAAACCCCGCTAATCCTAAATCCTTCTCTTGGAGGAGTCTCAGCCTCTTAATACTTTCATGTTTCAGAATAAT

AGGTCCGAATAAGGCAGGGTGCATAAGCTGTTTATACGGGACTGTTACTCAAGGCACTGACCCGATTAAAGTTAGTAACA

GTACACTCCCGTGAATCATACGAAGCATGGTAGGACGCTTAACTGGGACAGGAAAAGTC。

3.如权利要求1所述的通过哺乳动物细胞表达PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法，其特征在于，所述通过哺乳动物细胞表达PD-L1抗原免疫羊驼制备PD-L1纳米抗体的方法进一步包括：

步骤一：构建载体：目的片段扩增，换载酶切，目的片段与载体连接，转化，筛选克隆；

步骤二：进行蛋白鉴定、表达；

步骤三：构建抗体库：进行样品总RNA提取及cDNA合成，VHH文库片段的制备，电转化和文库构建；

步骤四：进行生物素化筛选和原核表达。