[发明专利]一种表达猪塞内卡病毒VP2基因的重组杆状病毒及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达猪塞内卡病毒VP2基因的重组杆状病毒及其制备方法与应用。本发明提供一种重组杆状病毒，其包含一个或多个拷贝的猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因。本发明还提供猪塞内卡病毒亚单位疫苗，其包含采用所述重组杆状病毒表达的猪塞内卡病毒VP2蛋白。本发明通过人工密码子优化，实现了猪塞内卡病毒的VP2蛋白的高水平、高纯度表达，最大程度地保留了VP2蛋白的免疫原性。本发明提供的猪塞内卡病毒亚单位疫苗具有优异的免疫原性和高度的安全性，对猪塞内卡病毒的感染发挥理想的免疫保护效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种表达A型猪塞内卡病毒 VP2基因的重组杆状病毒及其制备方法与应用以及包含猪A型猪塞内卡病毒VP2蛋白的亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)属于小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)Senecavirus病毒属，为无囊膜的单股正链RNA病毒，病毒粒子呈典型的二十面体对称。SVA病毒颗粒由四种结构蛋白组成，分别是VP1、VP2、VP3和VP4，其中VP1、VP2和VP3蛋白暴露在病毒颗粒表面，VP4蛋白包埋在病毒粒子内侧。SVA可引起猪鼻镜及蹄冠处出现水疱、溃烂创面从而导致跛足甚至死亡，被感染的仔猪(4日龄以内)死亡率达30％～70％。该病毒的感染和扩散对生猪养殖业具有非常不利的影响，因此，开发安全有效的SVA疫苗对于SVA 的防控至关重要。

申请号为201810003888.2的中国专利公开了利用塞内卡全病毒制备灭活疫苗的方法，然而，灭活疫苗在生产和应用过程中安全性较差，可能会出现灭活不充分而在动物体内返强的潜在危险。相比于灭活疫苗，亚单位疫苗具有更高的安全性，且具有良好的免疫原性。因此开发高效的SVA亚单位疫苗具有重要意义。

亚单位疫苗中作为抗原的病毒蛋白的自身免疫原性及其在表达制备过程中天然结构和免疫原性的保持是决定亚单位疫苗免疫效果的关键。VP2蛋白是诱导动物机体产生中和抗体的保护性抗原的主要成分。昆虫-杆状病毒表达系统是近年来常用的真核表达系统，具有以下优势：①昆虫杆状病毒表达系统为外源目的蛋白的正确折叠、二硫键和寡聚物的形成提供良好的环境，使表达的目的蛋白具有完整的生物学功能；②可对目的蛋白进行翻译后修饰，如磷酸化、糖基化、信号肽切除等，最大程度地还原了目的蛋白的天然状态；③表达水平高，最高能使目的蛋白的表达量占细胞总蛋白的30％；④安全性高、人畜无害；⑤能够容纳大分子量的插入片段或同时表达多个外源基因。

亚单位疫苗的规模化制备需要大量地制备抗原蛋白，因此，实现高水平、高纯度的蛋白表达是降低亚单位疫苗生产成本的首要关键问题。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的是提供一种表达A型猪塞内卡病毒VP2基因的重组杆状病毒及其制备方法与应用以及包含A型猪塞内卡病毒VP2蛋白的亚单位疫苗及其制备方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种重组杆状病毒，其包含一个或多个拷贝的猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因。

本发明中，所述VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

猪塞内卡病毒VP2蛋白的原始编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在保证序列和结构正确以及较高的免疫原性的同时，为实现猪塞内卡病毒VP2蛋白的高水平表达，本发明优选的VP2蛋白编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列为根据昆虫-杆状病毒表达系统的特点，通过特定的人工密码子优化和筛选获得。

为更好地保证VP2蛋白的高水平表达以及分泌性，同时便于纯化，在所述猪塞内卡病毒VP2蛋白的编码基因的5’端连接GP64信号肽序列，3’端连接His标签肽序列。