[发明专利]一种用SPF鸡制备TW1型鸡传染性支气管炎病毒阳性血清的方法

说明书

本发明公开了一种用SPF鸡制备TW1型鸡传染性支气管炎病毒阳性血清的方法。使用特定基因型(TW1型)的IBV毒种。方法为，使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒种及其油乳剂灭活疫苗，对50日龄的SPF雏鸡进行基础免疫和加强免疫，采血并分离血清；对血清进行无菌、外源病毒检测、中和效价测定和特异性检验，获得了特异性好、效价高的TW1型IBV阳性血清。本发明所述TW1型IBV阳性血清制备的方法，填补了TW1型IBV毒种无标准阳性血清的空白。选定了SPF雏鸡作为制备血清的试验动物，优化了血清制备过程中的免疫程序，提升了血清抗体中和效价。降低了生产成本，有利于阳性血清的批量制备。

技术领域

本发明涉及一种用SPF鸡制备鸡传染性支气管炎阳性血清的方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Avian infection bronchitis)是由鸡传染性支气管炎病毒(Avian infection bronchitis virus)引起的一种急性、高度接触性传染病，其主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统等。鸡传染性支气管炎病毒(简称IBV)的基因组核酸在复制过程中易发生突变和重组，不同型毒株之间生物学特性、致病性和组织嗜性复杂多变，根据其免疫原性的差异可将IBV分为众多的血清型，不同血清型IBV之间交叉保护性及血清中和效力相对较差，从而给疾病诊断和防治工作带来极大困难。因此，针对特定基因型的IBV毒种研制检测技术，对于快速有效诊断IBV的发生和流行具有重要意义。

根据现行《中华人民共和国兽药典》(中国兽药典委员会，中华人民共和国兽药典，二〇一五年版三部，中国农业出版社，2015，以下称《中国兽药典》)三部的规定，IBV活疫苗成品或制作疫苗的毒种须用抗IBV特异性血清进行中和试验，以检验外源病毒。本发明针对TW1型IBV毒种，研制其阳性血清的制备方法，为IBV毒种的鉴别分型、疫苗的效力及纯净性检验提供保障。

发明内容

本发明的目的在于通过SPF鸡对TW1型鸡传染性支气管炎病毒刺激所产生免疫反应获得免疫抗体——阳性血清。

本发明技术方案：

1.一种用SPF鸡制备TW1型鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，其特征在于该阳性血清是采用TW1型鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/XNGD/140株免疫SPF雏鸡制备的；该株病毒已于2019年06月19日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.17997。

2.本发明所述一种用SPF鸡制备TW1型鸡传染性支气管炎病毒阳性血清，其特征在于该血清的的制备包括以下步骤：

(1)种毒鉴定 对IBV CK/CH/XNGD/140株种毒的纯净性及基因型进行检测鉴定；

(2)制备灭活疫苗 使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒种接种SPF鸡胚，进行毒种扩繁；将扩繁好的鸡胚尿囊液进行浓缩、灭活和乳化，制备出免疫用的TW1型IBV灭活疫苗；

(3)血清制备

1)免疫 使用IBV CK/CH/XNGD/140株毒种滴鼻点眼免疫50日龄的SPF鸡。首免后14天，使用CK/CH/XNGD/140株毒种滴鼻点眼接种及其灭活疫苗颈部皮下、胸部肌肉注射加强免疫；二免后21天，使用CK/CH/XNGD/140株灭活疫苗加强免疫；三免后21天，使用灭活疫苗加强免疫。阳性血清制备过程共进行四次疫苗免疫；

2)采血 四免后14天，无菌采血；

3)分离血清 采用孵育、离心的方法分离血清，将分离的血清用0.22μm滤膜过滤，-20℃保存；

4)血清检验 对分离的血清进行无菌、支原体、外源病毒、血清中和效价测定和特异性检验，确定血清的纯净性、中和效力及特异性。