[发明专利]耐受高糖的脐带间充质干细胞及其制备方法

说明书

本发明提供了一种耐受高糖的脐带间充质干细胞及其制备方法，本发明通过采用胰岛素预处理具有分化能力，且有治疗糖尿病潜力的脐带间充质干细胞，提高脐带间充质干细胞的耐高糖性，从而有效提高脐带间充质干细胞在高糖环境下的存活率。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种耐受高糖的脐带间充质干细胞及其制备方法。

背景技术

间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）是干细胞家族的重要成员，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入和自我复制等特点而日益受到人们的关注。根据国际细胞治疗协会( ISCT )下属间充质和组织干细胞委员会所提出的定义人间充质干细胞最低标准：a )在标准培养条件下，间充质干细胞必须具有对塑料底物的黏附性；b )CD105、CD73、CD90呈阳性，CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19和HLA-DR呈阴性；c )在体外标准分化条件下，间充质干细胞能分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞。脐带间充质干细胞采集方便，无道德伦理争议，并且病毒感染几率低，培养成功率高；脐带间充质干细胞更原始，有更强的增殖和分化能力，是成人骨髓干细胞再生能力的10-20倍；具有免疫调节能力；扩增是培养体系统一，便于质控；具有低免疫原性，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，不存在免疫排斥的特性。

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。利用间充质干细胞的免疫调节、归巢分化潜能以及抗炎作用，减少胰岛素抵抗，阻止β细胞功能衰退，增加β细胞的数量，最大程度地挽救和恢复胰岛功能，有效控制血糖并防止并发症的发生。

但一部分糖尿病患者对于间充质干细胞治疗不敏感，治疗效果欠佳，这与糖尿病患者体内高糖环境导致MSC较低的移植存活率、MSC的功能受到不同程度的破坏以及MSC不能有效归巢于受损组织区域有关。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于，提供了一种耐受高糖的脐带间充质干细胞及其制备方法，本发明通过采用胰岛素预处理具有分化能力，且有治疗糖尿病潜力的脐带间充质干细胞，提高脐带间充质干细胞的耐高糖性，从而有效提高脐带间充质干细胞在高糖环境下的存活率。

本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：

本发明提供一种耐受高糖的脐带间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：将脐带间充质干细胞置于含FBS、胰岛素的α-MEM培养基中，在35-38℃、5％CO₂的培养箱中常规培养，获得耐受高糖脐带间充质干细胞。

优选地，所述FBS的浓度为10%，所述胰岛素的浓度为50-200mM。例如：50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM或200mM。

优选地，所述常规培养时间为24-48h。例如：24h、28h、30h、32h、34h、35h、36h、38h、40h、42h、44h、46h或48h。

优选地，所述脐带间充质干细胞为人脐带间充质干细胞。

优选地，所述脐带间充质干细胞为经传代培养的脐带间充质干细胞。

优选地，所述传代培养为将脐带间充质干细胞原代或者冻存的脐带间充质干细胞复苏后，在培养基中进行培养，然后再进行传代培养。

优选地，所述传代培养的具体过程为：将脐带间充质干细胞经原代培养后置于含10％FBS的α-MEM培养基中；然后，在35-38℃、5％CO₂的培养箱中常规培养传代，获得传代培养的脐带间充质干细胞。