[发明专利]一种去除肿瘤细胞中支原体污染的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种去除肿瘤细胞中支原体污染的方法及其应用，所述方法为：将支原体阳性的肿瘤细胞系移植到向NSI免疫缺陷小鼠体内并进行饲养，再将肿瘤细胞系从小鼠体内分离出来，获得支原体阴性肿瘤细胞系。该方法相对于目前常用的去除细胞支原体污染的方法其操作流程更为简单也更加安全，同时该方法避免了抗生素和高温因素，可把对细胞的伤害降到最低，且处理周期较短，也能够彻底清除肿瘤细胞中的支原体污染且不易复发。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种去除肿瘤细胞中支原体污染的方法及其应用。

背景技术

支原体是细胞培养中最常见、不易被察觉和干扰实验结果的污染物，约有30.3％-50.5％的细胞培养物中有支原体污染。培养细胞中支原体污染的来源包括：所使用的动物来源的一些产品如血清或已被支原体污染的细胞株系。细胞培养上清液中支原体的浓度可达10⁷个/mL，而培养的细胞看起来很正常，在肉眼观察或普通光学显微镜下观察，受污染的细胞可无明显变化。由于竞争营养及支原体有毒的代谢产物，支原体污染可显著影响培养细胞的生理活性，使研究结果的真实性和可靠性大大下降。

目前常用的去除细胞系支原体污染的方法主要有：抗生素处理法、加温处理法、巨噬细胞吞噬法。抗生素处理法的处理周期长，有一定的复发率，同时相对毒性较大，对细胞损害较大。加温处理法，对细胞损伤大，可能导致被处理的细胞发生形态变化，影响细胞状态。巨噬细胞吞噬法需要经过小鼠腹腔，有带入鼠类病毒污染的可能性。且现有技术中的支原体污染去除方法处理周期相对较长，且去除程度还很有限。

CN108753684A公开了一种去除PK15细胞中支原体的方法，具体包括以下步骤：(1)将长满单层的PK15细胞用0.25％胰酶消化分散，加入细胞生长液进行传代；(2)加入Plasmocin treatment试剂，继续培养；(3)待PK15细胞长成致密单层后进行传代，选用含有25μg/ml的Plasmocin treatment试剂的步骤(2)中配制的细胞生长液作为传代培养基，待PK15细胞长满后按1:5加入所述的传代培养基再连续传代4代，即获得无支原体的PK15细胞。

CN102409019A公开了一种用于清除细胞培养中支原体污染的试剂及其使用方法，所述试剂由A液、B液等体积混合或A液、B液、C液等体积混合而成，其中A液由半合成截短侧耳素衍生物和0.01MPBS混合，混合后溶质的质量-体积百分比浓度为0.5％-1.5％；B液由喹诺酮类衍生物和0.01MPBS混合，混合溶质的质量-体积百分比浓为0.5％-1.5％；C液由四环素类衍生物和0.01MPBS混合，混合后溶质的质量-体积百分比浓度为0.25％-0.75％。

目前现有技术中，去除培养细胞中支原体污染的策略还很有限，且没有一种专门针对于去除肿瘤细胞中支原体污染的方法，因此，开发出一种新型的、有效的、对细胞伤害小的、处理周期短的清除肿瘤细胞中支原体污染的方法是非常有意义的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种去除肿瘤细胞中支原体污染的方法及其应用。该方法提供了一种专门针对于清除肿瘤细胞系中支原体污染的策略，且去除细胞支原体污染的方法更加安全，同时对细胞伤害可降到最低，处理周期较短，操作流程较为简单。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种去除肿瘤细胞中支原体污染的方法，其特征在于，所述方法为：将支原体阳性的肿瘤细胞系移植到向NSI免疫缺陷小鼠体内并进行饲养，再将肿瘤细胞系从小鼠体内分离出来，获得支原体阴性肿瘤细胞系。