[发明专利]含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP中的应用

权利要求书

1.一种含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于:所述的苯并噻唑类化合物具有如下所示结构：

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2.根据权利要求1所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：

所述的荧光探针还包括一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

3.根据权利要求1所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：

所述的苯并噻唑类化合物由以下方法制备得到：2-甲基苯并噻唑与碘甲烷发生甲基化反应得到化合物2，然后将化合物2与Ar-CHO发生亲核反应得到苯并噻唑类荧光化合物，其中Ar-CHO为吲哚-3-甲醛，合成路线如下式所示：

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4.根据权利要求3所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：

所述的苯并噻唑类化合物具体由以下方法制备得到：

（1）将2-甲基苯并噻唑溶于溶剂中，加入碘甲烷，然后在氮气气氛下加热回流反应18h~24h，反应结束后即得到化合物2；

（2）将化合物2和Ar-CHO溶于溶剂中，加入吡啶作为催化剂，然后加热回流反应8h~16h，反应结束后即得到目标产物苯并噻唑类化合物；

步骤（1）中所述的2-甲基苯并噻唑和碘甲烷的摩尔比为1：2~3；

步骤（1）中所述的溶剂为乙腈、乙醇、DMF、甲苯中的至少一种；

步骤（2）中所述的溶剂为甲醇、乙醇中的至少一种；

步骤（2）中所述的化合物2、吡啶和Ar-CHO的摩尔比为1：0.2~0.5：1~1.5。

5.根据权利要求1所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于:包括以下步骤：

（1）将一系列浓度c-di-GMP标准品的水溶液先加热至95℃并在95℃保持5min，然后自然冷却至室温并在室温下保持10min后，分别加入苯并噻唑类化合物的DMSO溶液，形成混合溶液1，将混合溶液1在-20℃冰箱中孵育4-12h，然后进行荧光测试，用546 nm处的荧光值对样品浓度绘制标准曲线；

（2）将待测样品先于100℃加热10分钟，然后13000 g离心10分钟除去沉淀的蛋白后 ，取上清液加入苯并噻唑类化合物的DMSO溶液，形成混合溶液2，将混合溶液2在-20℃冰箱中孵育4-12h，然后进行荧光测试，根据546 nm处的荧光值对照标准曲线得出待测样品中c-di-GMP的浓度。

6.根据权利要求5所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测细菌信使分子c-di-GMP含量中的应用，其特征在于：

步骤（1）中所述的混合溶液1中c-di-GMP标准品的浓度为0~10µM；所述的混合溶液1中苯并噻唑类化合物的浓度为2.5~10μM；

步骤（2）中所述的混合溶液2中苯并噻唑类化合物的浓度为2.5~10μM；

步骤（1）和步骤（2）中所述的荧光测试的条件均为：激发波长为 485 nm,发射波长为500-700 nm。

7.一种含有苯并噻唑类化合物的荧光探针在检测c-di-GMP合成酶或c-di-GMP降解酶活力中的应用，其特征在于：

所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针具有如下所示结构：

所述的含有苯并噻唑类化合物的荧光探针通过检测细菌信使分子c-di-GMP的增加量或减少量实现在检测c-di-GMP合成酶或c-di-GMP降解酶活力中的应用。