[发明专利]采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法

说明书

本发明属于疫苗抗原技术领域，公开了一种采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法，包括以下步骤：采用鸡传染性支气管炎非免鸡蛋，控制前孵化条件进行前孵化；鸡传染性支气管炎病毒毒株接种于鸡胚，接种剂量为10^5.0EID₅₀/枚；接种后控制后孵化条件进行后孵化，接种后24h照检，弃去死胚，接种后36h后将鸡胚放入2~8℃冷藏室，冷藏12h后收获病毒尿囊液；对收获的病毒尿囊液检验毒价，浓缩，纯化得到鸡传染性支气管炎病毒抗原。该方法用非免鸡蛋替换SPF鸡蛋，同时确定了鸡传染性支气管炎病毒在非免鸡蛋中繁殖的工艺条件，既保证了疫苗质量，又降低了疫苗研究及生产成本，可为疫苗生产企业提供巨大的参考价值，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于疫苗抗原技术领域，涉及一种采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病，可引起鸡呼吸道、输卵管、肾脏、肠道及腺胃等多组织器官的病变，主要引起10周龄以下的鸡发病，以气管罗音、咳嗽、打喷嚏为主要临床特征，蛋鸡恢复后将丧失产蛋功能，成为“假母鸡”，严重威胁我国养鸡业的发展。鸡传染性支气管炎由于血清型复杂，相互之间没有或仅有部分交叉免疫保护，给鸡传染性支气管炎病的预防和控制带来诸多不便。

疫苗免疫是预防鸡传染性支气管炎的有效方法。灭活疫苗安全性好，不存在散播病原和毒力返强的问题，且能激发良好的体液免疫反应。但是，由于病毒抗原增殖的病毒毒价不高，需要加大浓缩倍数来获得合格的病毒抗原；而且在灭活疫苗免疫时使用剂量大，需要配合佐剂，制备比较复杂，成本较高。因而，从鸡传染性支气管炎灭活疫苗生产工艺入手，寻找既能提高疫苗质量和产量，又能节约生产成本的工艺方法，是亟待解决的问题。

在疫苗生产中通常用鸡胚培养毒株，鸡胚中尿囊液量的多少直接影响着疫苗生产的数量和经济效益。生产实践证明，胚胎对湿度的适应范围比较广，不像温度那么严格，湿度有良好的导热作用，可以使孵化初期的胚胎受热良好，有利于胚胎后期生理散热及胚胎发育。现有研究报道未见关于获得最大量尿囊液湿度的研究，而实际生产中，尿囊液量的多少直接影响着疫苗的产量。高湿度可以获得较多的尿囊液，湿度较大时，胚胎水分蒸发较慢，温度的变化对蒸发影响不大，因而尿囊液变化不明显，而当湿度降低时，胚胎水分蒸发加快，温度对蒸发影响相对加大，因而影响了尿囊液量的变化。因此，探究温度与湿度两个因素对鸡胚孵化过程中尿囊液量的影响，从而获得最大量的鸡胚尿囊液，在疫苗生产中具有重要意义。

由于SPF鸡胚对各种病原微生物均有敏锐的感受性，且重复性好，是研制病毒性禽病的高标准原材料。相反，普通鸡生活在自然环境中，常常容易受到各种病原微生物的感染，其产的鸡蛋也易含有各种未知的病毒或抗体。但是，由于SPF鸡蛋成本较高，而对于生产灭活疫苗来说，最主要的问题是鸡胚对病毒的易感性，故筛选对鸡传染性支气管炎病毒易感的非免鸡蛋取代价格昂贵的SPF鸡蛋来探究传支灭活疫苗的质量和产量，对降低疫苗生产成本也具有重要意义。

另外，鸡传染性支气管炎病毒在鸡胚上繁殖时，鸡胚的收获时间对病毒的毒价及尿囊液收获量的影响也较大。接毒后收获时间越晚，收获的尿囊液量越多，但病毒毒价可能较低；接毒后收获时间越早，收获的病毒毒价可能较高，但尿囊液量较少。故研究鸡胚最佳收获时间，对提高传支灭活疫苗的质量和产量，提高产品经济效益至关重要。

发明内容

本发明的目的在于针对鸡胚孵化过程中温度、湿度及鸡胚收获时间等因素难以确定，以及采用SPF鸡胚繁殖鸡传染性支气管炎病毒生产抗原时导致疫苗生产成本高的问题，提供一种采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法。

为实现上述目的，本发明提供一种采用非免鸡蛋制备鸡传染性支气管炎病毒抗原的方法，包括以下步骤：

步骤1：采用鸡传染性支气管炎非免鸡蛋，控制前孵化条件进行前孵化；