[发明专利]YAP蛋白在血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下增殖或凋亡中的应用

说明书

本申请涉及YAP蛋白在血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下增殖或凋亡中的应用。本申请涉及YAP蛋白与Hippo通路的相关性研究，还涉及YAP抑制剂，包括siRNA、shRNA。YAP抑制剂(siRNA、shRNA)转染血管平滑肌细胞后，会敲低YAP的表达。当YAP被敲低后，会抑制血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下的细胞增殖。这为血液疾病的治疗开拓了新的研究前景，为YAP抑制剂的深度开发和血液疾病的临床治疗提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及YAP蛋白在血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下增殖或凋亡中的应用。

背景技术

YAP(Yes-associated protein，YAP)是Hippo信号通路下游的主要效应分子，分子量为65kD，富含脯氨酸。由于该蛋白能够与非受体酪氨酸激酶YES的Src homolog domain 3(SH3)区结合，因而被命名为Yes-associated protein(YAP65)。人类YAP基因位于染色体11q22区，YAP存在2种变位剪切形式，即YAP1和YAP2。YAP1 具有一个WW结构域，而YAP2具有2个WW结构域。YAP蛋白广泛表达于除外周血白细胞外的各种组织中。YAP存在多个结构域或特异氨基酸序列，包括N端富含脯氨酸的结构域，转录因子TEADs结合区， 2个WW结构域，1个SH3结合基序，C端的转录激活域以及PDZ结合基序。通过这些结构域或氨基酸序列，YAP与多种蛋白互相作用，参与细胞内多条信号通路的调控，行使多种生物学功能。YAP主要定位于细胞核中，由于缺乏明显的DNA结合结构域，YAP被认为是转录共激活因子，需要与转录因子结合，起始下游基因的转录。

Hippo信号通路是目前报道的调节YAP活性的主要方式。Hippo 通路上游成员Mst1/2磷酸化该通路中其它3个核心成员WW45、Mob、 Lats1/2，活化的Lats1/2磷酸化下游效应分子YAP及其旁系同源物Taz，磷酸化的YAP和Taz与14-3-3结合，从细胞核转位至细胞质中，失去其转录共激活因子的活性。此外，YAP第381位丝氨酸被Lats1/2 磷酸化后促使其它位点的丝氨酸被CK1δ/ε磷酸化，最终使YAP通过泛素-蛋白酶体途径被降解。

血管平滑肌细胞(VSMC)是血管壁的主要组成细胞，受到血液流动产生的切应力、周期性张应力等力学因素的作用，是一种对应力敏感的细胞。有研究表明，在适宜的周期性应力作用下，血管平滑肌细胞可以发生增殖、分化和迁移，进而完成多种相关的生理活动。然而，应力刺激如何被VSMC感知，从而转化为生物化学信号来调控VSMC的增殖、分化和迁移，目前还缺乏深入的研究。本发明探索了YAP蛋白在血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下所起的作用，通过抑制YAP的含量/表达，能够调节血管平滑肌细胞应对机械应力刺激下的增殖或凋亡。这为血液疾病的治疗开拓了新的研究前景，为YAP抑制剂的深度开发和血液疾病的临床治疗提供了新的思路。

发明内容

本发明提供了一种siRNA，其核苷酸序列选自SEQ ID NO：1-3。

本发明提供了一种shRNA，其正义链的核苷酸如SEQ ID NO：4 所示，其反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。

本发明提供了一种载体，其包含所述siRNA或所述shRNA。

在一个方面中，所述载体选自质粒、脂质体、病毒或其它合适类型的载体。优选的，所述质粒选自真核细胞质粒；所述脂质体选自 lipofectamin；所述病毒选自慢病毒；更优选的，所述慢病毒选自慢病毒LV3。

本发明提供了一种宿主细胞，其包含所述siRNA、所述shRNA或所述载体。

在一个方面中，所述宿主细胞选自肌肉细胞；优选的，所述宿主细胞选自血管平滑肌细胞。

本发明提供了一种药物组合物，其包含所述siRNA、所述shRNA、所述载体或所述宿主细胞，以及药学上可接受的辅料。