[发明专利]一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及电分析化学技术领域，具体公开了一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极的制备方法及其应用。所述的电化学生物传感器工作电极的制备方法，包含如下步骤：(1)将粘土分散液均匀滴涂于玻碳电极表面，晾干后制得Clay/GCE；(2)将Clay/GCE置于变性Hb溶液中，于3～5℃冰箱静置吸附0.5～1.5h，使变性Hb固定在电极表面，吸附完成后以超纯水淋洗电极，晾干后得到uHb/Clay/GCE；(3)将GLU溶液均匀滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO‑GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的测定腐胺的电化学生物传感器工作电极。该电化学生物传感器工作电极具有良好的重现性和稳定性，且灵敏度高，适用于猪肉等样品中腐胺的检测。

技术领域

本发明涉及电分析化学技术领域，具体涉及一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极的制备方法及其应用。

背景技术

腐胺，别名1,4-二氨基丁烷，普遍存在于含蛋白质丰富的肉类等食品中，其含量是判断食品受微生物污染水平的指标之一，与食品的腐败密切相关。当腐胺的含量过高，就会对人体产生有害作用，如引起高血压和头痛。

目前食品中腐胺的检测方法主要有气相色谱法、液相色谱法、毛细管电泳法以及传感器法等。其中，生物传感器工作电极由于灵敏度高、特异性强以及快速简便等优点在腐胺的快速检测领域备受研究关注。因此，开发一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中对用于腐胺测定的电化学生物传感器工作电极的开发不足，提供一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极的制备方法。

本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：

一种测定腐胺的电化学生物传感器工作电极的制备方法，包含如下步骤：

(1)将粘土分散液均匀滴涂于玻碳电极表面，晾干后制得Clay/GCE；

(2)将Clay/GCE置于变性Hb溶液中，于3～5℃冰箱静置吸附0.5～1.5h，使变性Hb固定在电极表面，吸附完成后以超纯水淋洗电极，晾干后得到uHb/Clay/GCE；

(3)将GLU溶液均匀滴涂于uHb/Clay/GCE上，然后立即在其表面再滴涂DAO溶液，晾干后得到DAO-GLU/uHb/Clay/GCE，即所述的测定腐胺的电化学生物传感器工作电极。

二胺氧化酶(DAO)属于Ⅱ型铜蛋白，也称为含吡哆醛的胺氧化酶，腐胺等二胺可在DAO的催化作用下脱去氨基生成氨、醛及过氧化氢，通过测定过氧化氢的生成量可确定待测样品中生物胺的含量。DAO催化胺类物质的原理如下：

血红蛋白(Hb)是铁蛋白中的一种，由2个α和2个β亚基组成，每个亚基都有一条肽链，每条肽链都有一个含铁原子的环状血红素。血红蛋白结构很清晰，分布广泛，是研究生物传感器工作电极的理想模型。将血红蛋白固定于电极上，可以用来检测过氧化氢。其原理如下：

戊二醛(GLU)是一种常用的酶交联剂，在常温下，其醛基可与蛋白质或酶的氨基发生交联反应，有利于提高电极的稳定性。

本发明以GLU作为酶和蛋白的交联剂，通过滴涂法和物理吸附法制备由Clay、uHb和DAO共同修饰的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE；所述的DAO-GLU/uHb/Clay/GCE具有较高的稳定性以及对腐胺具有响应电流差值大以及较强的专一性等优点；使得其在腐胺测定过程中具有良好的选择性、重现性和稳定性，且具有灵敏度高检出限低等优点。