[发明专利]一种间充质干细胞无血清培养基及其用途

说明书

本发明涉及一种间充质干细胞无血清培养基及其用途，所述无血清培养基包括基础培养基和添加组分，所述添加组分包括以下成分：2'‑Deoxyadenosine、2'‑Deoxycytidine•HCl、2'‑Deoxyguanosine、L‑谷氨酰胺、人血清白蛋白、重组人转铁蛋白、重组人胰岛素、rhPDGF‑BB、rhFGF‑b、rhTGF‑beta1、rhEGF、硒酸钠及氢化可的松。采用本发明的无血清培养基，不含牛血清等动物来源的异源成分，能够有效替代血清进行骨髓间充质干细胞的培养，并且添加组分中各组分的协同作用使得该培养基在进行骨髓间充质干细胞培养时具有细胞周期缩短，增值迅速，细胞一致性好，能够有效维持骨髓间充质干细胞分子特性及分化潜能，通过该培养基获得的骨髓间充质干细胞适合于进一步的科学研究及临床应用研究。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种间充质干细胞无血清培养基及其用途。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)属于中胚层的多能干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，具有自我更新和多向分化能力，广泛存在于脐带组织、脂肪、骨髓、骨骼肌、骨外膜、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中。间充质干细胞具有非常强的分化能力，在特定的条件培养下，它可以增殖分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经细胞、肌细胞等多种类型的细胞。

间充质干细胞中，来源于骨髓的骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-DerivedMesenchymal Stem Cells，BM-MSCs)含量最为丰富，骨髓间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能，在适宜的体内或体外环境下具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力；具有免疫调节功能，通过细胞间的相互作用及产生细胞因子抑制T细胞的增殖及其免疫反应，从而发挥免疫重建的功能；具有来源方便，易于分离、培养、扩增和纯化，多次传代扩增后仍具有干细胞特性，并且表面抗原不明显，异体移植排异较轻，配型要求不严格。正是由于拥有这些特性，使得间充质干细胞能够提供一种理想的生物学平台，用于科学研究与临床应用，如细胞治疗、再生医学、药物筛选、基因治疗载体的建立、细胞发育与分化的分子调节机制研究、组织工程种子细胞等。2004年，Le Blanc等报道了首例半相合异基因间充质干细胞移植治疗GVHD获得成功，其后又报道了异基因配型不合的间充质干细胞移植治疗GVHD的有效性，并且认为在应用间充质干细胞治疗GVHD不需要严格的配型，其后又有多篇异基因未经配型的MSC治疗GVHD、促进造血重建的报道，其MSC来源涉及骨髓、脂肪、牙周等。目前，美国FDA已批准了近60项间充质干细胞的临床试验，主要包括：组织损伤的修复：骨、软骨、关节损伤、心脏损伤；肝脏损伤；脊髓损伤和神经系统疾病；自身免疫性疾病治疗：系统性红斑狼疮、硬皮病、炎性肠炎等；作为基因治疗的载体。

尽管骨髓的间充质干细胞含量最丰富，但是其在骨髓组织中的含量极低，采集难度及对机体损伤大，极大地限制了间充质干细胞的研究与应用，如何获得高活性、高一致性、更安全的骨髓间充质干细胞，是间充质干细胞研究应用的重要课题。传统的间充质干细胞培养仍需要添加胎牛血清，培养的间充质干细胞通过胞吞摄取牛血清蛋白而携带牛血清蛋白，能够引起受体免疫反应，同时有引入异源血清携带的细菌、病毒的风险，再者血清培养的细胞产率、传代次数有限，极大限制了间充质干细胞的应用。

发明内容

本发明目的是为了克服现有技术的不足而提供一种改进的间充质干细胞无血清培养基。

本发明的另一目的是提供上述间充质干细胞无血清培养基的用途。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案为：