[发明专利]一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明属于时间分辨荧光免疫分析技术领域，公开了一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法，快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒包括：测试反应杯；校准品反应杯；空白对照培养管，其内含有抗凝血物质；测试培养管；阳性对照培养管，其内含有抗凝血物质和细胞凝集素；实验缓冲液以及浓缩洗液；本发明还公开了快速时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法。本发明的试剂盒采用了γ‑干扰素体外释放法，联合采用了生物素亲和素法，双抗体夹心时间分辨荧光免疫法，实验方法简单快速，可自动化操作,检测系统为开放式操作系统。

技术领域

本发明属于时间分辨荧光免疫分析技术领域，尤其涉及一种快速时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：

结核病是由结核分枝杆菌复合群中的结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)和非洲分枝杆菌(Mycobacteriumafricanum)引起的慢性传染性疾病，可累及全身各个器官，其中尤以肺结核多见。结核分枝杆菌一般是由呼吸道结核病患者通过空气飞沫传染给新宿主。结核病的潜伏期为数周至数月，期间大部分感染者无明显症状。结核病严重危害公共安全，全世界每年有200万人死于结核病。在中国，每年有100万的新增结核病人。

结核分枝杆菌的镜检是最常用的诊断结核病的方法，但是该方法的阳性率低。结核分枝杆菌的培养是确定结核病的金标准，但是由于结核分枝杆菌的生长速度慢，试验周期长(2～3周)，不能满足临床的要求。另外，结核病还可以通过胸透，核酸检测，体格检查等方法确认。潜伏性结核菌感染是宿主感染结核分枝杆菌后的一种特殊状态，感染者体内的结核分枝杆菌处于持留状态，不能诊断为活动性结核病，但具有发展为活动性结核病的风险。对潜伏性结核菌感染的高危人群进行早期诊断和适当干预，在结核病控制中具有积极意义。结核菌素试验是唯一可以诊断潜伏性结核菌感染的方法，在结核杆菌感染后2～10周内结核菌素试验转为阳性。然而，有些感染者对结核菌素是没有反应的，这些人群中既包括那些各种原因导致免疫抑制者，也包括一些没有免疫抑制的人。此外，接种卡介苗，感染非致病性分枝杆菌，以及其他因素，会导致非结核菌感染者结核菌素试验阳性。

结核感染T细胞的γ-干扰素体外释放法(interferon-gamma release Assays，IGRAs)检测是通过结核分枝杆菌特异抗原所引发的细胞介导免疫(cell mediatedimmunity,CMI)反应来实现的。目前上市的试剂盒使用的抗原或多肽或其类似物主要有早期分泌抗原靶蛋白6(early secreting antigen target 6，ESAT6)、培养滤液蛋白10(culture filtrate protein-10,CFP-10)和TB7.7(p4)等中的一种或多种作为特异性刺激抗原，所有的卡介苗菌株及绝大部分的非结核分枝杆菌[堪萨斯分枝杆菌(Mycobacteriumkansasii)，苏尔加分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)，海氏分枝杆菌(Mycobacterium marinum)除外]不含有这些蛋白质。感染结核分枝杆菌复合群的患者的血液中通常含有能够识别这些蛋白质和其它分枝杆菌抗原的淋巴细胞，这一识别过程伴随着γ-干扰素的合成和分泌。IGRAs利用结核分枝杆菌特异性抗原或多肽或其类似物刺激人全血标本中的结核分枝杆菌抗原特异性T细胞产生免疫应答，再用免疫测定的方法定量测定人血清中免疫应答产生的γ-干扰素的浓度，从而判断受试者是否具有结核分枝杆菌特异的T细胞免疫反应，即结核感染T细胞检测。γ-干扰素为Th1细胞分泌的一种细胞因子，不但能够反映机体结核的Th1细胞免疫情况，还与体内结核菌的抗原含量密切相关。被结核分枝杆菌抗原致敏的T细胞再遇到同类抗原时能产生高水平的γ-干扰素，因此被用于结核潜伏感染的诊断。

现有的荧光免疫分析设备采用反射的方式，主要有以下几种：