[发明专利]一种双特异性抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种双特异性抗体及其制备方法与应用。本发明的双特异性抗体包含能结合CD20的结构域、能结合CD3的结构域和异源二聚体Fc区域，所述能结合CD20的结构域和能结合CD3的结构域各自独立地选自Fab区域、ScFv区域或sDab区域。本发明的双特异性抗体能稳定、高效靶向CD20和CD3，并能够介导T细胞特异性杀伤肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及一种抗体及其制备方法与应用，具体涉及一种双特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

B细胞表面的特异性抗原如CD19、CD20、CD22、CD52等是B细胞相关性疾病的潜在治疗靶点，其中CD20蛋白又被叫做B淋巴细胞限制性分化抗原、Bp35或B1，是人MS4A1基因所编码表达的四次跨膜、高度疏水的非糖基化磷蛋白，分子量为35kD左右^[1-3](Stashenko P,etal.J Immunol 1980,125(4):1678-1685；Einfeld DA,et al.EMBO J 1988,7(3):711-717；Oettgen HC,et al.Hybridoma 1983,2(1):17-28)。CD20特异性地表达于前B细胞以及成熟的B细胞表面，但在造血干细胞、祖细胞、浆细胞和其他正常体细胞中不表达。CD20还同时表达于B细胞淋巴瘤如：非霍奇金淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)等细胞表面^[4](Nadler LM,et al.J Clin Invest 1981,67(1):134-140)。CD20没有已知的天然配体，研究表明，CD20具有钙离子通道活性，通过调控细胞内钙离子浓度调节细胞周期，在B细胞激活即从G0期进入G1期的分化和生长过程中发挥特殊作用，同时调节细胞周期从S期进入有丝分裂期，也能诱导细胞凋亡^[5,6](Tedder TF,et al.Immunol Today 1994,15(9):450-454；Bubien JK ZL,et al.J Cell Biol 1993,121(5):1121-1132)。

由于CD20特异性地表达于多种B细胞相关的淋巴瘤细胞表面，前B细胞和其他体细胞上没有CD20的表达，并且CD20不轻易脱落或分泌，与抗体结合后不发生内吞，是治疗B细胞相关疾病非常具有潜力的理想靶点。目前针对CD20的治疗性单克隆抗体类药物有多种已上市，根据作用机理可将其分为两类：Type I和Type II，Type I类抗体主要通过CDC(补体依赖的细胞毒性作用)和ADCC(抗体依赖的细胞毒性作用)发挥功能，Type II类主要通过PCD(程序性细胞死亡)和ADCC发挥功能^[7](Meyer S,et al.Br J Haematol 2018,180(6):808-820)。人鼠嵌合抗体利妥昔单抗(Rituximab，商品名：Rituxian/美罗华)为第一代CD20抗体(Type I)，1997年被FDA批准用于治疗NHL，随后又被批准用于治疗类风湿性关节炎、CLL等疾病；全人源单抗奥法木单抗(Ofatumumab，商品名：Arzerra)为第二代CD20抗体(Type I)，与美罗华相比，奥法木单抗对CD20的亲和力更强，细胞试验显示CDC反应也更强，ADCC反应与美罗华类似，于2009年被FDA加速批准用于治疗氟达拉滨或阿仑单抗治疗无效的CLL，后又被批准用于治疗滤泡淋巴瘤、视神经脊髓炎、弥漫性和复发性多发性硬化症等疾病；人源化单抗Obinutuzumab单抗(商品名：Gazyva)为第三代CD20抗体(Type II)，由于经过了糖基化改造，增强了抗体与NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞的亲和力，因而比美罗华有更强的ADCC反应，同时Obinutuzumab单抗通过中性粒细胞导致的胞吞作用和细胞死亡能更有效地诱导B细胞凋亡^[8](Golay J,et al.Blood 2013,122(20):3482-3491)，2013年被FDA批准与苯丁酸氮芥联合治疗过往未接受治疗的CLL。