[发明专利]一种开关型脂质体纳米荧光探针及其制备方法和用途

说明书

一种开关型脂质体纳米荧光探针包括近红外荧光染料和其外面包裹的脂质体磷脂膜；该脂质体磷脂膜由胆碱类衍生物、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇2000组成；所述开关型脂质体纳米荧光探针通过将疏水染料包裹于脂质体内核中，相比于将疏水染料负载于脂双层的传统方法，染料的负载率更高，稳定性能更好，并且结合了荧光可激活的优点。所述探针制备过程简单，成本低，使用方便，体内的成像效果好。

技术领域

本发明属于纳米技术和荧光诊断研究领域，尤其涉及一种开关型脂质体纳米荧光探针及其制备方法和用途。

背景技术

针对肿瘤的近红外荧光成像技术具有优异的分辨率和灵敏度，并且近红外荧光成像在生物组织中的穿透深度大，成像信号受组织的影响也比较少，是近几年发展起来的一种新型成像手段。荧光造影剂(如吲哚青绿(ICG)，亚甲蓝(MB)等)本身的肿瘤选择性差，造成肿瘤信号背景比(TBR)很低。而TBR被认为是评估和选择荧光造影剂的重要标准，所以提高荧光探针的TBR对肿瘤荧光成像非常重要。将染料包裹于纳米载体中，可以有效提高它的稳定性和特异性。

脂质体在包裹近红外荧光染料方面都具有广泛的应用，将荧光染料包裹在脂质体中，可以提高染料的特异性，提高荧光探针的TBR。比如，将常用的亲水染料ICG和疏水染料IR780分别包裹于脂质体的亲水内腔和疏水夹层，得到常用的脂质体荧光探针ICG脂质体和IR780脂质体。具有聚集诱导猝灭效应(ACQ)的适量荧光染料包裹于脂质体中可以还构成一种开关型荧光探针，其荧光成像背景干扰少，可以进一步提高荧光探针的TBR。但是，现有的ACQ-脂质体探针都是将高浓度亲水染料负载于亲水相，或是将高浓度的疏水染料包裹在疏水相来实现，它们的开关性能受限于包载率和染料分子间的距离。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种将疏水染料通过主动负载的方式包裹于脂质体水相内核中的开关型脂质体纳米荧光探针及其制备方法和用途。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种开关型脂质体纳米荧光探针，包括疏水近红外荧光染料和其外面包裹的脂质体磷脂膜；该脂质体磷脂膜由胆碱类衍生物、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000组成；脂质体的亲水空腔装载所述疏水近红外荧光染料；

所述疏水近红外荧光染料为DiR(1,1'-双十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚三碳菁碘化物)；

所述胆碱类衍生物选自相变温度高于室温的磷脂如二硬脂酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱中的至少一种。

根据本发明的实施方案，所述脂质体磷脂膜中胆碱类衍生物、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000与近红外荧光染料的摩尔比为45～65:30～50:1～10:1～10，优选为50～60:35～45:3～7:3～7，还优选为55:40:5:5。

根据本发明的实施方案，所述开关型脂质体纳米荧光探针的粒径为50～500nm，优选为100～400nm，还优选为120-200nm。

本发明还提供上述开关型脂质体纳米荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

S1)将胆碱类衍生物、胆固醇和二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000溶解于溶剂中，蒸发形成脂质膜；

S2)将硫酸铵水溶液加入到步骤S1)制备的脂质膜中进行水合后挤出，再用醋酸缓冲液进行透析，形成硫酸铵梯度，得到脂质体溶液；

S3)将疏水近红外荧光染料的DMSO溶液与步骤S2)制备的脂质体溶液进行混合，得到疏水近红外荧光染料-脂质体混合液；

S4)将步骤S3)制备的混合液在磷酸盐缓冲液中进行透析，得到亲水空腔包裹疏水近红外荧光染料的开关型脂质体纳米荧光探针。