[发明专利]一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法

说明书

本发明提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱，它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：1)参照物溶液的制备；2)供试品溶液的制备；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。本发明酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，建立的指纹图谱具有很强的特异性，特征峰的规律性强，一致性较好，可作为酒蒸黄连的质量评价方法，同时也可用于酒蒸黄连中格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱的含量测定，并能有效鉴别酒蒸黄连。

技术领域

本发明具体涉及一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法。

背景技术

中药(TCM)是在中医理论指导下生产的药物，其是许多化学物质的集合，并且在这些组分中的一种或多种中有效。因此，用现有的质量评价方法难以真实地反映中药的多效性和完整性，难以准确反映中药的内部综合质量。因此，多组分同时测定的质量控制模型已成为未来中药质量控制的关键。多指标成分的定量分析是中药质量控制的最直接方法，可以揭示化学成分含量的变化，是中药质量控制的关键环节。

在中国药典中，黄连是Coptis chinensis Franch,Coptis deltoideaC.Y.Chenget Hsiao,or Coptisteeta Wall.的干燥根茎。黄连在我国用药历史悠久，味连是目前的主流品种。在中医理论中，黄连具有“清热燥湿、泻火解毒”的功能。目前，现代药理研究表明，黄连可用于治疗腹泻、黄疸、高热、头晕、烦躁不安、失眠、心悸不安等。酒蒸黄连是黄连的炮制加工产品，对治疗糖尿病有很好的效果。

近年来，有文献表明，小檗红碱在黄连酒蒸过程中可产生，是小檗碱的代谢产物，具有多种生物活性，如降血糖作用，抗肿瘤作用，抗炎作用等。研究表明，酒蒸黄连能够改善3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗，增强脂肪细胞吸收葡萄糖的能力，并利用其在体外提高细胞水平的胰岛素抵抗。

降血糖药有益于改善糖尿病患者的症状，表明小檗碱是酒蒸黄连的活性成分之一，有抗糖尿病活性。然而，到目前为止，酒蒸黄连的质量控制体仍然缺乏，酒蒸黄连未被纳入2015年版中国药典，极少的文献研究它的含量测定。因此，为酒蒸黄连建立全面的质量控制方法非常重要。

目前HPLC-ELSD、HPLC和UPLC-PAD可用于黄连的质量控制。在2015版《中国药典》和《香港中药材标准》中，分别采用4和2个化学组分对黄连质量进行控制。目前，酒蒸黄连的质量控制是建立在黄连的基础上，对酒蒸黄连缺乏专属性研究。此外，同时测定酒蒸黄连中的格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱尚无报道。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种酒蒸黄连的HPLC指纹图谱检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取生物碱类对照品，加甲醇溶解，即得；

2)供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇-盐酸提取，过滤，取滤液，加甲醇稀释2-5倍，即得；

3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：

进一步地，步骤1)所述生物碱类对照品为格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小襞碱和/或小檗红碱。

更进一步地，所述格兰地新、非洲防己碱、表小檗碱、盐酸药根碱、盐酸黄连碱、小檗红碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱在参照物溶液中浓度分别为1.36μg/ml，7.12μg/ml,0.643μg/ml,4.176μg/ml,18.33μg/ml,0.515μg/ml,15.708μg/ml和58.32μg/ml。