[发明专利]一种通过RAPD检测鉴别螺旋藻藻丝沥水性能优劣的方法

权利要求书

1.一种通过RAPD检测鉴别螺旋藻藻丝沥水性能优劣的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从培植池取钝顶螺旋藻藻液，用毛细吸管显微分离法挑取长度≥300 μm的藻丝单体，培养成藻丝群体；

（2）对步骤（1）中所得藻丝群体取样，然后用序列为 5’-AGGGCCGTCT-3’ 的引物S90的进行随机扩增及多态性DNA分析与检测；如果最终无法用引物S90扩增出590 bp的条带，表明被鉴别藻丝具有良好沥水性能；反之，则表明被鉴别藻丝沥水性能差。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中培养条件为：以40 W日光灯为光源，光照强度54 μmol photons·m^-2·d^-1，按光照12 h和黑暗12 h交替的方式控制光照条件，光照时温度28℃、黑暗时温度20℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法具体包括：

（1.1）从规模化生产的培植池中取5 mL螺旋藻藻液，用毛细吸管显微分离法挑取长度≥300 μm的藻丝单体5条，分别置于编号且盛有1.0 mL Zarrouk培养液的2.0 mLEppendorf管中培养25 d，培植成藻丝群体；

（1.2）从步骤（1.1）的每只Eppendorf管中各吸取0.1 mL藻液，分别转入编号且盛有1.0mL Zarrouk培养液的2.0 mL Eppendorf管中继续培养；每只Eppendorf管中剩余0.9 mL藻液分别用滤纸过滤收集藻体并编号，提取各管藻体的基因组DNA；

（1.3）分别利用RAPD技术对步骤（1.2）过滤收集到的藻体的基因组DNA进行多态性分析，如果最终无法用引物S90扩增出590 bp的条带，表明被鉴别藻丝具有良好沥水性能；反之，则表明被鉴别藻丝沥水性能差；

（1.4）根据步骤（1.3）的鉴定结果，从步骤（1.2）继续培养的藻丝中，挑选出沥水性能好的藻丝的Eppendorf管，将其中的藻丝用于工厂化培植生产。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤（1.3）中的RAPD技术具体包括：

（2.1） 25 µL PCR反应体系中含10倍的PCR缓冲液2.5 µL、4种dNTP各1 µmol/L、引物0.5 µmol/L、2.5 U的TaqDNA聚合酶、100 ng基因组DNA；PCR反应程序为94℃ 5 min、94℃30s、36℃ 1 min、72℃1 min，35个循环，最后72℃延伸10 min；

（2.2）将步骤（2.1）中的扩增产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳，电压4 V/cm；电泳完后用EB染色30 min，再在VersaDoc^TMImaging System 3000凝胶成像系统观察并照相。