[发明专利]一种同时测定虎掌南星中7种有机酸的HPLC方法

说明书

本发明提供了一种同时测定虎掌南星中4种有机酸的HPLC方法(草酸、L‑苹果酸、枸橼酸和富马酸)的HPLC方法，该方法还能同时检测另外3种有机酸(琥珀酸、顺式乌头酸和反式乌头酸)。本发明的HPLC检测方法，能同时测定虎掌南星药材中的多种有机酸成分，且操作简单，灵敏度高，专属性好，准确度高，可以有效地评价虎掌南星药材的质量。

技术领域

本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种同时测定虎掌南星中7种有机酸的HPLC方法。

背景技术

虎掌南星来源于天南星科半夏属植物虎掌(掌叶半夏)Pinellia pedatisectaSchott的干燥块茎，具有燥湿化痰，祛风定惊，消肿散结的功效。治中风痰壅，口眼歪斜，半身不遂，癫痫，惊风，破伤风，风痰眩晕，喉痹，瘰疬，痈肿，跌扑折伤，蛇虫咬伤。

关于虎掌南星药材及其同属植物半夏的含量测定已有许多报道，但只是测定其中的2～4种成分。众所周知中药的多效性源于其复杂的化学成分，仅靠一两个成分的含量测定不能反映其他成分的情况，难以真正控制其质量。选择更多的成分作为指标进行质量控制研究，更能合理、全面评价虎掌南星药材质量。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种同时测定虎掌南星药材中4种有机酸的HPLC方法。

本发明的虎掌南星中有机酸的HPLC测定方法，包括如下操作步骤：

1)对照品溶液的制备：取对照品，溶解，即得对照品溶液；

2)供试品溶液的制备：取虎掌南星药材，提取，即得供试品溶液；

3)分别吸取对照品和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：190～260nm；流动相：乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液-甲醇-乙腈为流动相B；梯度洗脱程序如下：

其中，步骤1)所述对照品包括：草酸、L-苹果酸、枸橼酸和富马酸对照品。

更进一步地，该方法还能同时检测另外3种有机酸：琥珀酸、顺式乌头酸和反式乌头酸。

其中，步骤1)所述溶解是加入水溶解。

其中，步骤2)所述提取是指：加入水，超声提取，离心，取上清液，加入乙酸乙酯萃取。

其中，步骤2)所述提取方法如下：

取虎掌南星药材，加入药材25～200w/v(g/mL)倍的水，超声提取30～90min，放冷，用水补足减失的质量，滤过或离心(10000r/min，离心5min，取上层清液再离心一次)，精密量取清液5mL，加磷酸(或盐酸)后，摇匀，用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯，减压浓缩至干，残渣加0.1％磷酸溶液使溶解，并定容，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

进一步地，所述提取方法如下：

取虎掌南星药材粉末(过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入药材100w/v(g/mL)倍的水，称定质量，超声提取60min，放冷，用水补足减失的质量，滤过或离心(10000r/min，离心5min，取上层清液再离心一次)，精密量取上清液5mL，加磷酸(或盐酸)0.5mL，摇匀，用乙酸乙酯萃取5次，每次25mL，合并乙酸乙酯，减压浓缩至干，残渣加0.1％磷酸溶液使溶解，并定容至5mL，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。

其中，所用色谱柱为Intersil ODS-3 C₁₈色谱柱；规格为4.6mm×250mm，5μm。

其中，所述检测波长为210nm。