[发明专利]水痘-带状疱疹病毒gE蛋白突变体及其表达方法有效
| 申请号： | 201910575791.3 | 申请日： | 2019-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN112142829B | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 周晨亮;何强;沈巧英;周凌云;江元翔;刘革;曾宪放;史力;莫呈钧;张智 | 申请（专利权）人： | 怡道生物科技（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/04 | 分类号： | C07K14/04;C12N15/38;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 彭星 |
| 地址： | 江苏省苏州市高新*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水痘 带状 疱疹病毒 ge 蛋白 突变体 及其 表达 方法 | ||
1.一种野生型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的突变体，其特征在于，所述突变体相较野生型水痘-带状疱疹病毒gE蛋白中的成熟抗原序列，在成熟抗原序列的第141位由亮氨酸突变为甲硫氨酸；所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。
2.一种gE基因，其特征在于，其编码权利要求1所述的水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的突变体，所述gE基因能够在CHO细胞中表达水痘-带状疱疹病毒gE蛋白的突变体。
3.如权利要求2所述的gE基因，其特征在于，所述gE基因的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示。
4.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体中含有权利要求2或3所述的gE基因的核苷酸序列。
5.如权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述的表达载体为携带杀稻瘟菌素抗性基因的质粒表达载体和/或携带博莱霉素抗性基因的质粒表达载体。
6.一种基因工程化的细胞，其特征在于，所述的细胞含有权利要求4或5所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求2或3所述的gE基因。
7.如权利要求6所述的细胞，其特征在于，所述的细胞是CHO细胞。
8.一种具有免疫原性的蛋白，其特征在于，所述的蛋白为VZV病毒的gE蛋白，所述gE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述的gE蛋白是由CHO细胞表达的。
9.如权利要求8所述的具有免疫原性的蛋白，其特征在于，所述的具有免疫原性的蛋白通过以下方法制备获得:
(1)培养如权利要求6或7所述的基因工程化的细胞，从而在细胞内表达所述的VZV病毒的gE蛋白；
(2)分离所述的VZV病毒的gE蛋白。
10.一种制备权利要求8所述的具有免疫原性的蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括:
(1)培养如权利要求6所述的基因工程化的细胞，从而在细胞内表达所述的VZV病毒的gE蛋白；
(2)分离所述的VZV病毒的gE蛋白。
11.一种在CHO细胞中表达VZV病毒的gE蛋白的方法，包括下述步骤：(1)将权利要求2或3所述的gE基因克隆入表达载体中；
(2)将步骤(1)所得的表达载体转化至CHO细胞中；
(3)通过迷你细胞群的筛选和单克隆筛选，获得稳定表达gE蛋白的细胞株；
(4)使用步骤(3)所得的细胞株进行表达，获得VZV病毒的gE蛋白。
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