[发明专利]一种基于激光共聚焦显微镜的癌症标志物成像方法

说明书

本发明公开了一种基于激光共聚焦显微镜的癌症标志物成像方法。该方法是由核酸适配体特异性地识别癌症标志物，在结合量子点后，可以用于成像的研究。利用这种方法，以循环肿瘤细胞表面的上皮细胞黏附分子为目标物，实现了激光共聚焦显微镜下的成像。这种方法快速，灵敏，特异性优良，成像清晰准确，是一种具有潜在应用前景的方法。

技术领域

本发明属于显微镜研究技术领域，具体涉及一种基于激光共聚焦显微镜的癌症标志物成像方法。

背景技术

癌症是危害人类健康的最大杀手（Brindle K. New approaches for imagingtumour responses to treatment[J]. Nature Reviews Cancer, 2008, 8(2): 94-107）。相关数据显示，2007年有13%的人死于癌症，而这一数据在2030年会上升到12亿人次（Scheinberg, D. A.; Villa, C. H.; Escorcia, F. E.; McDevitt, M. R.,Conscripts of the infinite armada: systemic cancer therapy usingnanomaterials. Nat Rev Clin Oncol 2010,7 (5), 266-276.）。因此，建立有效的癌症早期检测及诊断方法显得尤为重要。据已有文献报道，越来越多的科学家关注低浓度细胞的超灵敏检测，可以将细胞表面的蛋白质作为重要的生物标志物进行检测，这些蛋白质的数量和状态的改变可以提示我们疾病的发生与发展。

激光共聚焦显微镜是一种高精度的激光源显微镜，利用激光作为光源，在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理，并利用计算机对所观察分析对象进行数字图像处理的一套观察和分析系统。它能极大地超越传统显微镜，近年来在多领域研究中凸显优势。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于激光共聚焦显微镜的癌症标志物成像方法。

本发明以上皮细胞黏附分子（EpCAM）作为目标研究物，采用核酸适配体（aptamer）特异性地识别上皮细胞黏附分子，进而标记量子点探针，从而实现了在激光共聚焦显微镜下成像观察。

本发明提出的一种基于激光共聚焦显微镜的癌症标志物成像方法，具体步骤如下：

（1）在核酸适配体序列的末端修饰生物素，得到核酸适配体-生物素（aptamer-biotin）；

（2）在量子点CdSe上修饰链霉亲和素（SA），得到QDs-SA；

（3）在清洗干净的ITO玻璃上修饰13nm的纳米金颗粒，滴加核酸适体，室温孵育14小时，再加入巯基乙醇封闭30分钟，最后加入癌症标志物。每一步结合后均用缓冲溶液（50mM Tris-HCl）清洗，氮气吹干。

（4）向步骤（3）的基底中加入步骤（1）得到的aptamer-biotin，室温孵育1小时，用缓冲溶液（50mM Tris-HCl）清洗，氮气吹干。

（5）向步骤（4）中加入步骤（2）得到的QDs-SA，室温孵育1小时，用缓冲溶液（50mMTris-HCl）清洗，氮气吹干。

（6）在激光共聚焦显微镜下，设置波长458nm激发，在500-600nm范围内采集图像数据

本发明中，步骤（3）所述癌症标志物为上皮细胞黏附分子(EpCAM)。

本发明中，步骤（3）所述上皮细胞黏附分子的浓度为10aM-500nM，体积为5µL-10µL。

本发明中，步骤（3）所述的aptamer-biotin的体积为1µL至5µL，浓度5µM-10µM。

本发明中，步骤（3）所述的QDs-SA体积为1µL至5µL，浓度5µM-10µM。