[发明专利]一种提升人体脂肪含量的方法

说明书

本发明公开了一种提升人体脂肪含量的方法，包括以下步骤：S1、无菌条件下取人体皮下脂肪组织，将其移入预先盛有D‑Hanks液的平皿，漂洗5～8次，用眼科剪去除脂肪组织中可见的血管和结缔组织；S2、然后剪切组织块至8～10mm三小块，用组织匀浆机180～200r/min匀浆至乳糜状；继而加入0.1％胶原酶I培养基消化30min，其间每5min振荡1次，S3、经200目不锈钢细胞筛过滤去除未消化组织块及大体积的脂肪细胞，将细胞悬液移入离心管，2000r/min离心5min；弃去离心后的上清液。该提升人体脂肪含量的方法，通过通过无菌膜稳定试剂以及PRP和重组人VEGF‑C处理后的脂肪细胞群，在递送或给予受试者之前、期间或之后，能增加脂肪细胞群的移植物的存活率，从而极大的增加了人体脂肪的含量。

技术领域

本发明涉及脂肪细胞培养技术领域，具体为一种提升人体脂肪含量的方法。

背景技术

在血管生成过程中依赖多种生长因子的活性，例如，血管内皮生长因子(VEGF)，碱性成纤维生长因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)。

血管内皮生长因子(VEGF)是一种分泌性糖蛋白，起着维持原有血管密度及维持血管对运输营养物质所必需的通透性的作用。VEGF的生物学作用包括：促进内皮细胞增殖，VEGF可以诱导内皮细胞表达蛋白水解酶、间质胶原酶和组织因子，降解细胞外基质，使得血管内皮细胞向内生长，从而诱导血管形成。提高血管的通透性，Roberts等发现，VEGF作用致内皮细胞之间的间隙增大，同时导致内皮细胞上出现穿孔。此作用发生于毛细血管后微静脉及毛细血管和肌肉静脉水平。血管生成是脂肪移植存活率提高的关键，而在此过程中的各个阶段均有VEGF表达的增强，作为血管生成的关键调节因子，VEGF在血管再生过程中发挥着重要作用。

VEGF表达的调节受到一些血清来源和旁分泌的生长因子与细胞因子的影响，包括血小板源生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、肿瘤坏死因子(TNF)、转移生长因子(TGF)等都能使许多培养皮肤细胞中的VEGF表达高3-20倍，而创伤修复各阶段均有上述生长因子的表达。其中，bFGF对其有直接的调节作用，因为bFGF可以上调VEGF的产生，二者具有协同作用。

富血小板血浆(PRP)是通过离心自体全血而获得的血小板浓缩物。因PRP可来源于自体，其获取简便，无免疫排斥反应，并发症少，研究证实，PRP还具有使脂肪间充质干细胞增殖和分化的作用。国内外已有将PRP应用于颅面及皮肤软组织修复等的研究报道。Willemsen等做了24例富血小板血浆自体脂肪的双侧臀部移植，结果证实臀部的PRP脂肪注入术是安全有效的，其具有低并发症和持续稳定性。总之PRP混合自体颗粒脂肪组织移植能加速移植组织早期血管重建，避免纤维化和脂肪细胞凋亡。

由于外伤和老化，自体脂肪移植是用于软组织增添和填充软组织缺损的普遍和理想的技术。最新证据表明由于其吸收和脂肪的低存活率，脂肪移植物的早期和足够的血管化是必不可少的。然而，由于移植后脂肪细胞死亡增加，脂肪移植物的相对较高的再吸收率降低了该技术的效力。虽然血管生成因子(Kuramochi等，2008)，以及VEGF基因治疗(Lei等，2008)已被单独用于在脂肪移植物中刺激血管生成，以提高脂肪细胞的存活率和生存能力，但是临床结果却不尽人意。因此，降低移植脂肪的再吸收率是临床上的一个挑战。

已经尝试各种促进移植的方法，以下总结其中的一些。

PCT公布NO.2005/018549公开了用于组织修复(如骨、软骨)的方法和组合物。根据其教导，组织移植物(如脂肪组织、肌肉组织)可离体与一种或更多种的生物活性剂(如促红细胞生成素)接触，从而刺激组织中的至少一部分细胞分化成所需类型的细胞(如骨细胞)，然后将该组织植入受试者中。