[发明专利]一种检测蛋白的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种检测蛋白的试剂盒及其应用，涉及生物化学检测技术领域，本发明所述试剂盒包括：1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物；2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物；3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B；所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原，且没有交叉反应。本发明所述试剂盒适用范围广且可以灵活组合，能够检测大部分蛋白，包括细胞因子，分泌型蛋白，胞内蛋白以及细胞表面蛋白。

技术领域

本发明涉及生物化学检测技术领域，尤其涉及一种检测蛋白的试剂盒及其应用。

背景技术

流式细胞术(Flow Cytometry，FCM)是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球、细菌、小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。作为应用流式细胞术进行检测的技术平台，现代流式细胞仪产生于上世纪六七十年代。经过近四十年的发展和完善，今天的流式细胞仪已经十分成熟，并被广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面，涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域，在各学科中发挥着重要的作用。

结合免疫荧光方法，流式细胞术可辨认和计数带有不同表面特异性抗原的细胞，例如用荧光素标记的免疫球蛋白鉴别T和B淋巴细胞，根据细胞表面抗原的不同，进一步分辨出不同的T和B淋巴细胞亚群，以及测定每个细胞所带抗原的数量、密度及其动力学参数等。也可用流式细胞分选技术将带有「+」和不带有「－」的某种特异抗原的细胞群体分类收集，供研究其功能特性。

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

在临床诊断中，蛋白分子是常见的检测指标。临床中常见的待测蛋白包括细胞因子，胞内蛋白，细胞表面蛋白，分泌型蛋白等多种形式。对于细胞表面蛋白或者胞内蛋白可以用免疫组化的方法进行检测；对于细胞因子，分泌型蛋白以及部分胞内蛋白用免疫组化方式难以检测，因此流式是较好的检测方法。但流式无法直接检测蛋白分子只能检测细胞，为克服这一问题，常规采用CBA法，即利用人工合成的微球替代细胞，在该微球表面包被待测蛋白的抗体，当待测样本含有相应待测蛋白时，人工微球上的抗体能够捕获它，再加入PE染料偶联的抗蛋白抗体，该荧光抗体就可以与蛋白，微球形成三明治夹心结构，最后在流式中进行检测。但常规方法适用范围小，并不能实现多种类型蛋白的检测。

发明内容

本发明为了克服现有流式细胞术和免疫组化反应对分泌型蛋白无法直接检测的缺陷，提供了一种检测蛋白的试剂盒及其应用，可用于多种类型蛋白的检测，本发明所述试剂盒适用范围广且可以灵活组合，能够检测大部分细胞因子，分泌型蛋白，胞内蛋白以及细胞表面蛋白。

本发明提供了一种检测蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：

1)羊抗兔IgG与PAMAM的偶联物；

2)羊抗鼠IgG与量子点的偶联物；

3)待测蛋白的鼠抗A和兔抗B；

所述鼠抗A与兔抗B需满足检测同一抗原，且没有交叉反应。

优选的是，所述待测蛋白包括细胞因子、胞内蛋白、细胞表面蛋白和分泌型蛋白。

优选的是，所述羊抗鼠IgG与量子点的偶联物的制备方法，包括以下步骤：

S1、将量子点溶解于活化液中，再依次加入Sulfo-NHS和EDC溶液，活化3～8min，离心弃去上清，将得到的沉淀用活化液溶解，得到活化量子点溶液；

所述活化液为含质量浓度0.01％吐温20的pH值为7.4的5mM BS缓冲液；