[发明专利]视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2及其制备方法和试剂盒

权利要求书

1.一种制备视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2的方法，其特征在于，

所述视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2为pH为7.0～8.0的缓冲体系，所述缓冲体系包含有：视黄醇结合蛋白单克隆抗体包被的羧基化聚苯乙烯胶乳溶液和恢复液，所述胶乳溶液在整个磷酸盐缓冲体系中的含量为400～600mL/L，其中：

所述恢复液包含氯化钠，PAMAM，聚氧乙烯月桂醚，牛血清白蛋白，叠氮钠，所述牛血清白蛋白的含量为5～10g/L，聚氧乙烯月桂醚的含量为2～5g/L，PAMAM的含量为0.5～5g/L，氯化钠的含量为5～15g/L，叠氮钠的含量为0.5～5g/L；所述恢复液中各组分的含量是指占整个缓冲体系的含量；

所述胶乳溶液为pH为5.0～6.0的缓冲溶液，包括：粒径为50～200nm的羧基化聚苯乙烯胶乳微球、活化用的EDC、偶联加速用的PAMAM和封闭剂；所述羧基化聚苯乙烯胶乳微球的含量为10～15g/L，所述EDC的含量为0.5～1g/L，所述PAMAM的含量为1～4g/L，所述封闭剂的含量为2.5～5g/L；所述胶乳溶液中各组分的含量是指占整个胶乳溶液的含量；

所述胶乳溶液由羧基化聚苯乙烯胶乳微球经EDC活化后偶联视黄醇结合蛋白单克隆抗体，并由PAMAM维持偶联效率，最后经封闭剂封闭反应得到；

所述方法包括如下制备步骤：

(1)、将配方量的羧基化聚苯乙烯胶乳微球缓慢滴加分散在缓冲溶液中，加入配方量的EDC溶液，搅拌活化，同时滴加配方量的PAMAM溶液，得到初始液；

(2)、往步骤(1)制备的初始液中加入视黄醇结合蛋白单克隆抗体进行偶联反应，反应结束后加入配方量的封闭剂进行封闭反应，并超声分散，得到视黄醇结合蛋白单克隆抗体包被的羧基化聚苯乙烯胶乳溶液；

(3)、将适量的恢复液加入到步骤(2)的胶乳溶液中，并调节pH至7.0～8.0，即得视黄醇结合蛋白胶乳试剂R2；

所述封闭剂为BSA溶液；

所述缓冲体系为磷酸盐缓冲体系。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述视黄醇结合蛋白单克隆抗体在所述缓冲体系中的浓度为0.2～0.5g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羧基化聚苯乙烯胶乳微球的粒径为50～200nm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述EDC溶液中的EDC的浓度为10～20g/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述活化的时间为10～20分钟；所述步骤(2)中，所述偶联反应的时间为1～2小时，所述封闭反应的时间为0.5～1.5小时。