[发明专利]抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用

说明书

本发明公开了抑制HIV‑1病毒感染的scFv序列及其应用。基于HIV‑1中和抗体VRC01的可变区重链(V_H)和轻链(V_L)，利用自有方法将其序列相连组成scFv，共得到与HIV‑1的gp120蛋白具有较高亲和力的9条scFv分子。本发明部分实例的scFv序列，对HIV‑1病毒具有很好的亲和力，可以有效抑制病毒对靶细胞TZM‑bl细胞的感染。使用本发明部分实例的scFv序列，可以构建得到可以抑制HIV‑1病毒感染的CAR‑T细胞，该CAR‑T细胞可以强有力地介导靶细胞的裂解，释放LDH。本发明部分实例的CAR‑T细胞，通过负载多种具有不同scFv序列的CAR分子，可以更好地避免HIV‑1病毒突变导致的逃逸，具有更为广谱的HIV‑1病毒抑制效果。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗技术领域，具体涉及抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用。

背景技术

人类免疫缺陷病毒1型(Human Immunodificiency Virus Type-1,HIV-1)感染后，联合抗逆转录病毒疗法(combined antiretroviral therapy,cART)可以有效地抑制病毒复制。然而，由于病毒整合在被感染细胞中并形成一个稳定的潜伏感染储存库，被感染者一旦停止cART治疗，病毒血症即在短时间内再爆发，这构成了治愈HIV-1感染的主要障碍。

当前的研究热点是通过特异性的潜伏感染逆转药物(latency-reversingagents,LRAs)激活潜伏感染的病毒，进而药物治疗或诱导机体免疫系统杀灭被感染细胞。这种干预策略被称为“shock and kill”。然而，HIV-1可以迅速的发生突变以逃避免疫识别。研究显示在经过cART 治疗的感染者当中，即使成功激活了其潜伏感染，体内的CD8⁺ T淋巴细胞由于缺乏对HIV-1 有效的免疫应答，所以不能完全清除被感染的细胞。因此，在“shock and kill”策略中，为了更好的清除潜伏感染储存库，需要在被感染者体内重建强有力的免疫监控机能。

近年来，由于具有高亲和力、TCR(T cell receptor)非依赖和MHC(majorhistocompatibility complex)非限制等特点，嵌合抗原受体(chimeric antigenreceptor,CAR)的免疫细胞疗法成为了杀伤肿瘤细胞的全新途径。CAR是由抗体靶向区域与T细胞激活胞内信号区融合而成，从而赋予细胞特异性抗原识别能力。通过在患者自体免疫细胞中表达识别肿瘤天然抗原的 CAR分子并对进行过继免疫回输，可以特异性的靶向杀伤患者体内的肿瘤细胞。CAR-T细胞疗法已在白血病和淋巴瘤的临床治疗中证明了有效性，并且获得了令人鼓舞的成功。该策略也可应用于抗病毒治疗，包括HIV-1、HBV(hepatitis Bvirus)和HCV(hepatitis C virus)等病毒感染的治疗。但是，传统构建的CAR分子还不能完全满足各种疾病的免疫治疗。

前期研究中，发明人将HIV-1广谱中和抗体VRC01来源的scFv序列和全新设计的第三代CAR分子胞内段序列连接在一起并转导CD8⁺ T细胞，产生了HIV-1特异性的VC-CAR-T细胞。相比已报道的CD4-CAR-T细胞，VC-CAR-T细胞介导特异性杀伤效果更加明显。并且首次证明了该疗法可以有效清除cART治疗HIV-1感染者样本中被激活的潜伏感染储存库(Liu et al,Journal of Virology,90:9712-9724.2016)。

但是HIV-1具有较高的突变率，从而产生逃逸克隆。有必要开发出更多对HIV-1病毒感染具有抑制作用的分子。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：