[发明专利]一种用于检测比伐卢定中杂质的方法

说明书

本发明公开了一种用于检测比伐卢定中杂质的方法，所述的检测方法包括使用高效液相色谱法检测比伐卢定样品中的杂质，特别是和主峰极性接近的杂质[D‑Phe¹²]‑比伐卢定(杂质I)、[L‑Phe¹]‑比伐卢定(杂质II)、[D‑Leu²⁰]‑比伐卢定(杂质III)、[Plus‑Gly⁵Gly⁶]‑比伐卢定(杂质IV)、[Des‑Gly⁵Gly⁶]‑比伐卢定(杂质V)能和主峰进行有效分离的方法。本方法中各杂质的检测限约0.15μg/ml，即可以检出比伐卢定中高于0.01％的杂质；本方法不仅能有效检出分离USP中披露的6个杂质，同时能够有效分离其它5个极性接近的潜在工艺杂质，实用性强，检测过程简单快捷。

发明领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及用于一种用于检测比伐卢定中杂质的高效液相方法。

背景技术

比伐卢定(Bivalirudin)的有效抗凝成分为水蛭素衍生物片段，通过直接并特异性抑制凝血酶活性而发挥抗凝作用，无论凝血酶处于血循环中还是与血栓结合，本品均可与其催化位点和阴离子结合位点)发生特异性结合，从而直接抑制凝血酶的活性。其作用与肝素不同，它不依赖于抗凝血酶、肝素辅因子等。凝血酶是凝血反应中起核心作用的丝氨酸蛋白酶：它水解纤维蛋白原生成纤维蛋白单体；激活凝血因子；促进纤维蛋白交联形成稳定血栓的共价结构，凝血酶激活凝血因子；激活血小板，促进血小板聚集和颗粒释放。

比伐卢定为人工合成的二十肽，由20个氨基酸残基组成的线性肽，其中1位为D型Phe，其肽序结构为：

D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH化学结构式如下：

比伐卢定的合成目前基本上都是通过固相法和液相法合成制备得到，由于合成步骤较长，合成过程中产生的杂质种类比较多，这些杂质与主成分比伐卢定的化学结构极为相似，如果控制不好，有可能产生严重的毒副作用。

经文献检索，USP比伐卢定质量标准草案中披露了6个已知杂质，分别为H-[12-20]-比伐卢定(杂质VI)、H-[1-11]-比伐卢定(杂质VII)、[Des-Glu¹³]-比伐卢定(杂质VIII)、[Asp⁹]-比伐卢定(杂质IX)、[Plus Gly⁵]-比伐卢定(杂质X)和[Des Gly⁵]-比伐卢定(杂质XI)；采用方法1分析检测4种杂质，分别为杂质VI、杂质VII、杂质VIII和杂质IX；采用方法2分析检测2种杂质，分别为杂质X和杂质XI。USP比伐卢定质量标准草案采用2种分析方法对6种潜在的杂质进行分析检测，操作较为繁琐，检验工作量大。