[发明专利]一种检测猪血浆和肺泡液中甲磺酸达氟沙星的方法

说明书

本发明公开了一种检测猪血浆和肺泡液中甲磺酸达氟沙星的方法，包括如下步骤：(1)采用乙腈提取猪血浆和肺泡液中的目标化合物，离心后取上清；(2)于50℃、氮气吹至干燥，复溶，离心，过滤，得到样品提取物；(3)上样，进行高效液相色谱检测，流动相为乙腈‑0.05％磷酸，A相为乙腈，B相为0.05％磷酸，梯度洗脱。本发明建立了猪血浆和肺泡液中甲磺酸达氟沙星的样品提取和检测方法，具有简单快速、灵敏度高的特点。

技术领域

本发明涉及兽药代谢临床检测技术领域，特别是涉及一种检测猪血浆和猪肺泡中甲磺酸达氟沙星的方法。

背景技术

达氟沙星(Danofloxacin)是第3代动物专用氟喹诺酮类药物，能抑制细菌DNA旋转酶的合成而呈现杀菌作用，具有抗菌谱广、杀菌活性强、体内分布广泛、与其他抗菌药无交叉耐药等特点。以甲磺酸盐的形式给药后，吸收迅速、生物利用度高、组织中浓度高。目前达氟沙星在亚洲、欧洲、北美洲和拉丁美洲等很多国家已被批准应用于治疗牛、猪和鸡等兽禽类动物因细菌和支原体感染引起的呼吸道疾病。因此，临床药物代谢临床试验中常要求对猪血浆和肺泡液样本进行检测。

传统的血浆样本前处理方法一般采用有机试剂提取，固相萃取小柱萃取，耗时较长，且成本较贵。肺泡灌洗技术是近年来发展起来的一种新技术，可用于检测呼吸道药物在肺泡液中的浓度，对于临床试验研究具有重要意义。目前，临床尚没有检测猪肺泡液中的药物的统一方法。因此，建立一种新的快速、有效、经济的适用于猪血浆和肺泡液的样品前处理方法具有重要意义。

目前，甲磺酸达氟沙星临床药代检测方法主要采用高效液相色谱法(HPLC)。但目前已有的检测方法主要针对于牛奶、奶油、鸡蛋等可食性组织，不适用于动物血液样品检测。动物血液样品中包含较多的杂质，影响了药物的检测。因此，建立一种适用于猪血浆和肺泡液中甲磺酸达氟沙星的检测方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测猪血浆和猪肺泡中甲磺酸达氟沙星的方法，以解决上述现有技术存在的问题，满足临床药代分析。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种检测猪血浆和猪肺泡中甲磺酸达氟沙星的方法，包括以下步骤：

(1)准备样品提取物：取猪血浆，加入提取剂，涡旋，离心，取上清，沉淀物再加入提取剂进行2次提取，涡旋，离心，取上清，合并两次上清，氮气吹至干燥，加入初始流动相溶解，离心，取上清，过滤，得到猪血浆样品提取物；

取猪肺泡液，加入提取剂，涡旋，离心，取上清，沉淀物再加入提取剂进行2次提取，涡旋，离心，取上清，合并两次上清，氮气吹至干燥，加入初始流动相溶解，离心，取上清，过滤，得到猪肺泡液样品提取物；

(2)将步骤(1)制备的猪血浆和猪肺泡液样品提取物装入样品瓶，进行高效液相色谱检测。

优选地，步骤(1)中所述提取剂为乙腈。

优选地，所述猪血浆为将新鲜猪血与0.1g/mL的肝素钠按体积比1000:1混合后，3500r/min离心10min，分离上清，即为所述猪血浆。

优选地，所述猪肺泡液为将采集的新鲜猪肺泡灌洗液离心，转速为800r/min，离心时间为10min，分离上清，即为猪肺泡液。

优选地，所述样品提取物与提取剂的体积比为1：4。

优选地，所述涡旋时间为5min。

优选地，所述离心时间为10min，转速为10000r/min。

优选地，所述初始流动相为磷酸和乙腈的混合液，体积比磷酸：乙腈＝9:1。