[发明专利]一种牛体外受精的受精液及其使用方法

说明书

本发明公开了一种牛体外受精的受精液及其使用方法，受精液包括不含肌醇的SOF基础培养基，还包括以下添加剂：L‑精氨酸、L‑天冬氨酸、L‑肉碱、肾上腺素、青霉胺、亚牛磺酸、肝素。采用本发明的受精液，可有效保证牛胚胎体外受精率和受精胚胎的发育质量。

技术领域

本发明涉及家畜胚胎工程技术领域，更具体的说是涉及一种牛体外受精的受精液及其使用方法。

背景技术

家畜胚胎体外培养是一项具有潜在研究价值和商用价值的技术，可广泛应用于胚胎体外移植、动物基因编辑育种及优良家畜品种扩增等方面。但至今体外培养获得的胚胎在质量及数量上往往不及在体内正常发育的胚胎，在牛体外受精中，往往使用的是冷冻保存的精液，这导致了体外受精时精子的质量不稳定，浓度低，导致胚胎受精率不稳定，形成原核的受精卵少，进而影响原核融合和卵裂，影响早期胚胎体外发育，显著制约着此技术的广泛应用。

因此，如何改善牛体外受精的受精液并建立一套稳定的使用方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种牛体外受精的受精液及其使用方法，促进早期胚胎体外发育。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种牛体外受精的受精液，包括不含肌醇的SOF基础培养基，还包括以下添加剂：L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-肉碱、肾上腺素、青霉胺、亚牛磺酸、肝素。

肝素是精子细胞化学活能物质，L-精氨酸、L-天冬氨酸、肾上腺素、亚牛磺酸和L-肉碱够较好的刺激精子细胞的体外活力；青霉胺可促精子入卵，亚牛磺酸和L-肉碱能减缓细胞毒素乙醛-过氧化级联反应的最终物质，从而限制ROS的有害作用；L-精氨酸还有提高细胞活力，改善细胞形态的保护作用。

七种添加剂添加到受精液中，可有效提高牛精子活力，提高牛体外受精时受精胚原核形成率和受精胚的发育质量。

进一步，所述L-精氨酸的浓度为10-100mg/L，L-天冬氨酸的浓度为1-10mg/L，L-肉碱浓度为10-100μM，肾上腺素浓度为0.2-20μM，青霉胺浓度为2-200μM，亚牛磺酸浓度为1-100μM，肝素浓度为5-20mg/L。

进一步，所述受精液还包括必需氨基酸、非必需氨基酸和无脂肪酸牛血清白蛋白。

进一步，所述必需氨基酸体积分数为0.1-2％，非必需氨基酸体积分数为0.1-2％，无脂肪酸牛血清白蛋白浓度为1-100mg/mL。

通过控制必需氨基酸、非必需氨基酸及无脂肪酸牛血清白蛋白可进一步提高牛胚胎体外发育质量。

进一步，每100mL所述SOF基础培养基包括26.168mg CaCl₂·2H₂O、9.999mgC₆H₅Na₃O₇·2H₂O、2.923mg谷氨酰胺、37.218mg MgSO₄·7H₂O、1.000mg酚红、53.378mg KCl、16.195mg KH₂PO₄、4.402mg丙酮酸钠、210.025mgNaHCO₃、629.399mgNaCl和0.0757mg乳酸钠。

进一步，所述受精液还包括12μg/mL庆大霉素和12μg/mL头孢霉素。

进一步，一种牛体外受精的受精液的使用方法，将成熟后牛卵母细胞置于权利要求1-6中任一项所述的受精液中与精子进行共培养。