[发明专利]植物作为宿主在表达Albiglutide中的应用在审
| 申请号： | 201910549721.0 | 申请日： | 2019-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN110229822A | 公开（公告）日： | 2019-09-13 |
| 发明（设计）人： | 王跃驹;马磊;唐辉 | 申请（专利权）人： | 王跃驹 |
| 主分类号： | C12N15/16 | 分类号： | C12N15/16;C12N15/82;A01H5/00 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘颖 |
| 地址： | 美国俄勒冈州，科瓦利斯*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 宿主 重组蛋白质生产 生物活性测试 生物技术领域 农杆菌介导 农杆菌侵染 表达体系 蛋白杂交 平台技术 外源蛋白 有效表达 真空渗透 生菜 血糖 应用 血液 成功 生产 | ||
1.植物作为宿主在表达Albiglutide中的应用；所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。
2.一种表达载体，其特征在于，包括Albiglutide的序列以及双元植物载体。
3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述Albiglutide的序列为将Albiglutide的密码子优化为植物偏好的密码子，获得优化的Albiglutide的序列。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述优化的Albiglutide的序列中核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述优化的Albiglutide的序列中氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示。
5.根据权利要求2至4任一项所述的表达载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：
步骤1：将Albiglutide的密码子优化为植物偏好的密码子，获得优化的Albiglutide的核苷酸序列；
步骤2：在所述优化的Albiglutide的序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端加入Sac I位点，克隆到pUC57载体中，获得pAlbi克隆载体；
步骤3：通过Xbal/Sacl从步骤2所得的pAlbi克隆载体中获得基因片段，克隆至双元植物载体pCam35S，获得表达载体p35S-Albi。
6.根据权利要求2至5任一项所述的表达载体在表达Albiglutide中的应用。
7.一种植物作为宿主表达Albiglutide的方法，其特征在于，将如权利要求2至5任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入植物组织后，提取、分离蛋白质，获得Albiglutide。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述植物选自生菜、菠菜、番茄、萝卜、白菜、玉米、大豆、小麦或烟草；所述植物的器官选自种子、叶、根茎或整株植物。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：
步骤1：抽真空25～45s；
步骤2：保持真空(-95kPa)压力30～60s；
步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；
重复上述步骤2～3次，避光处理4d。
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