[发明专利]非人哺乳动物模型及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910549708.5 | 申请日： | 2019-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN112126659A | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 许永;吴东海;聂涛;赵雪梅;赵世亭;惠晓艳 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N9/22;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 非人 哺乳动物 模型 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
将Cas9 mRNA、gRNA和同源重组载体导入非人哺乳动物的受精卵中，使得在非人哺乳动物的雄激素受体基因终止密码子位点前，通过同源重组定点敲入串联肽-荧光素酶表达框；
所述gRNA包括：核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的两个片段；
所述同源重组载体上5’同源臂、串联肽基因、荧光素酶基因和3’同源臂依次连接；所述5’同源臂和所述3’同源臂可以与所述非人哺乳动物的基因组发生同源重组。
2.根据权利要求1所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，所述串联肽基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.根据权利要求1所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，所述荧光素酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
4.根据权利要求1任一项所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，转录得Cas9 mRNA的Cas9的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
5.根据权利要求1-4任一项所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，所述非人哺乳动物为小鼠。
6.根据权利要求5所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠为C57BL/6J小鼠。
7.根据权利要求6所述的非人哺乳动物模型的构建方法，其特征在于，所述雄激素受体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
8.权利要求1-7任一项所述的构建方法构建得到的敲入有雄激素受体-荧光素酶基因的非人哺乳动物模型。
9.权利要求8所述的敲入有雄激素受体-荧光素酶基因的非人哺乳动物模型在筛选调控雄激素受体表达水平的药物中的应用，或在筛选治疗雄激素受体表达水平变化导致的疾病的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，所述雄激素受体表达水平变化导致的疾病包括：多囊卵巢综合征、前列腺癌，雄激素不敏感综合征、延髓脊髓性肌萎缩、男性乳腺癌等。
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