[发明专利]管状类组织结构体及其构建方法

权利要求书

1.管状类组织结构体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、制备打印墨水；

B、体外培养用于打印的细胞，得到细胞培养液；

C、将打印墨水与细胞培养液分别连接生物打印机的不同喷头，共同打印到缠绕棒上，形成无缝的管状组织，然后去掉缠绕棒，即为中空的管状类组织结构体；

其中，打印墨水的材料为细胞相容性及生物相容性好的温敏材料和/或生物材料；所述生物材料采用一种或多种天然生物材料和/或人工合成生物材料；

所述天然生物材料选自明胶、明胶衍生物、藻酸盐、藻酸盐衍生物、纤维素、纤维素衍生材料、琼脂、基质胶、胶原、胶原衍生物、氨基酸、氨基酸衍生物、蛋白多糖、蛋白多糖衍生物、糖蛋白及衍生材料、透明质酸、透明质酸衍生物、壳聚糖、壳聚糖衍生物、DNA水凝胶材料、层连接蛋白、纤连接蛋白、纤维蛋白、丝素蛋白、丝素蛋白衍生物中的至少一种；

所述人工合成生物材料选自聚丙烯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚丙交酯、聚乙交酯、聚乳酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚羟基酸、聚乳酸醇酸共聚物、聚二甲基硅氧烷、聚酸酐、聚酸酯、聚酰胺、聚氨基酸、聚缩醛、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基甲酸酯、聚吡咯、聚酯、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚氧化乙烯中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所述细胞为血管细胞，所述血管细胞选自血管内皮细胞、血管内皮祖细胞、微血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血管成纤维细胞、间充质干细胞、周细胞中的至少一种，优选血管内皮细胞和间充质干细胞；

其中，所述血管细胞是组织中提取获得的，或者由干细胞分化而来的。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缠绕棒为玻璃棒；和/或

喷头与缠绕棒之间的距离为3-4mm；和/或

带动缠绕棒旋转的电机驱动器转速为0-10000cts/s，而带动打印喷头平动的电机驱动器转速为0-10000cts/s。

4.按照权利要求1-3任一项所述方法构建得到的管状类组织结构体。

5.管状类血管结构体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将0.02g牛血纤维蛋白原溶于500μl的DMEM/F-12 HEPES培养液中，得到纤维蛋白原溶液；

2)将人脐静脉内皮细胞HUVEC用EBM-2 Endothelial Growth Basal Medium进行体外培养并传代，打印前培养至第四代，用PBS冲洗细胞，然后向培养瓶内加入Trypsin-EDTA，于37℃培养箱中消化2分钟，然后加入EBM培养液终止消化；放入离心机进行离心，弃上清，用培养液重悬细胞，计数后再次离心，弃上清，向细胞沉淀中加入步骤1)的纤维蛋白原溶液，得到4×10⁶cells/ml的含细胞纤维蛋白原溶液，作为打印试剂1；

3)用DMEM/F-12 HEPES培养液配制20U/ml的凝血酶母液；打印前，向0.12g无水氯化钙中加入500μl的凝血酶母液，溶解后放入37℃培养箱孵育5分钟，作为打印试剂2；

4)将打印试剂1和2分别连接生物打印机的不同喷头，共同打印到缠绕棒上，形成无缝的管状组织，然后去掉缠绕棒，即得中空的管状类血管结构体。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤4)中喷头与缠绕棒之间的距离为3-4mm；和/或

带动缠绕棒旋转的电机驱动器转速为为0-10000cts/s，而带动打印喷头平动的电机驱动器转速为0-10000cts/s。