[发明专利]一种FMR1基因CGG重复序列的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种FMR1基因CGG重复数的PCR扩增反应检测引物组合，其特征在于：包括第一引物、第二引物、第三引物和第四引物，第一引物与第二引物位于FMR1基因5’端非转录区中CGG重复序列外的上游与下游，第三引物含CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC序列重复序列与非人源性基因组序列，第四引物包含第三引物的非人源性基因组序列，第一引物、第二引物、第三引物和第四引物中至少一种引物包含荧光修饰；

第三引物在PCR扩增反应中的终浓度低于第一引物、第二引物与第四引物在PCR扩增反应中的终浓度至少1000倍；

第三引物的CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC重复序列，包含4到7个CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC重复序列；

所述的第一引物与第二引物包括以下序列：

第一引物P1：5’-CGCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCC-3’；

第二引物P2：5’-GTAGAAAGCGCCATTGGAGCCCCGCACT-3’；

所述的第三引物与第四引物包括以下序列：

第三引物P3：

5’-CTCGACGCACGCTCCTGCACAGCCTCCGGCGGCGGCGGCGG-3’；

第四引物P4：5’-CTCGACGCACGCTCCTGCACAGCCTC-3’；或

第三引物P5：5’-TGACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCTCGGCGGCGGCGGCGG-3’；

第四引物P6：5’-TGACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCT-3’；

其中划单线部分为非人源性基因组序列，加粗部分为CGG重复序列。

2.一种FMR1基因CGG重复数的PCR扩增反应检测引物组合，其特征在于：包括第一引物、第二引物、第三引物和第四引物，第一引物与第二引物为包含FMR1基因5’端非转录区中CGG重复序列以外的序列与非人源性基因组序列组成的上游与下游引物，第三引物含CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC序列重复序列与非人源性基因组序列，第四引物包含第一引物、第二引物和第三引物的非人源性基因组序列，第一引物、第二引物、第三引物和第四引物中至少一种引物包含荧光修饰；

第三引物在PCR扩增反应中的终浓度低于第一引物、第二引物与第四引物在PCR扩增反应中的终浓度至少1000倍；

第三引物的CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC重复序列，包含4到7个CGG、GGC、GCG、CCG、GCC或CGC重复序列；

所述的第一引物、第二引物、第三引物、第四引物序列如下：

第一引物P7：

5’-GCACGCTCCTGCACAGCCTCCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCC-3’，

第二引物P8：

5’-GCACGCTCCTGCACAGCCTCAGCGCCATTGGAGCCCCGCACTTCCA-3’，

第三引物P3：

5’-CTCGACGCACGCTCCTGCACAGCCTCCGGCGGCGGCGGCGG-3’

第四引物P4：5’-CTCGACGCACGCTCCTGCACAGCCTC-3’；

或

第一引物P9：

5’-ACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCTCAGCTCCGTTTCGGTTTCACTTCC-3’，

第二引物P10：

5’-ACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCTAGCGCCATTGGAGCCCCGCACTTCC-3’，

第三引物P5：

5’-TGACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCTCGGCGGCGGCGGCGG-3’，

第四引物P6：5’-TGACCGTCTGCGCCTCGTTCCGGCT-3’；

其中划单线部分为非人源性基因组序列，加粗部分为CGG重复序列。

3.一种FMR1基因CGG重复数的检测试剂在制备脆性X综合症相关基因FMR1基因核酸检测试剂盒中的应用，其特征在于：所述脆性X综合症相关基因FMR1基因核酸检测试剂盒组成成分包括FMR1反应液、DNA聚合酶、FMR1阳性对照、FMR1阴性对照；

所述FMR1反应液中包含引物组合物，所述的引物组合物为权利要求1或2中的引物组合中的一种或多种；

所述FMR1反应液中包含增强剂，所述增强剂包括甜菜碱、二甲基亚砜、甘油或乙二醇中的一种或多种，FMR1反应液中甜菜碱的浓度为1.5 ~ 2M、二甲基亚砜的浓度为0.5 ~ 6.0%v/v、甘油的浓度为2.5 ~ 8.0% v/v、乙二醇的浓度为0.3 ~ 1.2M；

所述FMR1阳性对照包含FMR1基因中的10、29、36、54、85、120、142与大于200个CGG重复数的质粒。