[发明专利]一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法

说明书

本发明涉及一种大叶金腰染色体核型分析的制片方法,大叶金腰Chrysosplenium macrophyllum Oliv.是一种低矮的常绿草本，因含有黄酮类而具有重要药用开发价值。本发明公开一种适合大叶金腰染色体核型分析的制片方法，包括从大叶金腰新鲜植株获取根尖、预处理、固定、前低渗、酶解去壁、后低渗、涂片和染色、镜检和观察的过程。本发明提供一种简单适用的大叶金腰染色体核型分析制片方法，为大叶金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类及开发应用研究奠定基础。

技术领域

本发明属于细胞遗传学和细胞生物学领域，具体涉及一种金腰的染色体制片方法。

背景技术

大叶金腰(Chrysosplenium macrophyllum Oliv.)为虎耳草科(Saxifragaceae)金腰属(Chrysosplenium)多年生草本植物，其叶互生，具柄，叶片近圆形至阔卵形，边缘具11-13圆齿，腹面疏生褐色柔毛，背面无毛，叶柄具褐色柔毛。花茎疏生褐色长柔毛。基生叶数枚，具柄，叶片革质，倒卵形，先端钝圆，全缘或具不明显之微波状小圆齿，基部楔形，腹面疏生褐色柔毛，背面无毛；茎生叶通常1枚，叶片狭椭圆形，边缘通常具13圆齿，背面无毛，腹面和边缘疏生褐色柔毛。多歧聚伞花序；花序分枝疏生褐色柔毛或近无毛；苞叶卵形至阔卵形，先端钝状急尖，边缘通常具9-15圆齿(有时不明显)，基部楔形；萼片近卵形至阔卵形，先端微凹，无毛；雄蕊高出萼片；子房半下位，花柱长约5mm，近直上；无花盘。蒴果；种子黑褐色，近卵球形，密被微乳头突起。花果期4-6月。

金腰属植物全球约70种，亚、欧、非、美四洲均有分布，以亚洲温带分布为主。中国目前发现金腰属植物约36种，广泛分布于云南、西藏、四川、贵州、湖北、湖南、东北等二十多个省份。

金腰属植物因富含黄酮类化合物而具较高药用价值，《中国植物志》、《中国药植图鉴》以及《全国中草药汇编》均有关于本属植物的药效记载，用于清热解毒、治疗肝胆病等。金腰的药用历史在中国传统医药中有广泛应用和记载，如藏药中称其为亚吉玛，藏医学者帝玛尔·丹增平措著作《晶珠本草》中载有“亚吉玛生于高山石隙，味苦性凉，缓吐泻，治胆疾。”此外金腰属植物还被收录于蒙医学著作《无误蒙药鉴》中。近年来有研究表明，金腰属植物普遍含有较高的黄酮类及三萜类化合物具良好抗肿瘤和抗病毒活性，从裸茎金腰C.nudicale中分离到的五环三萜对恶性褐色瘤(A375)、4种胃癌(ST-KM,KaTo-III,NKPS,KKLS)和膀胱癌(KK-47)都具较强抑制作用，且该属植物中特有且普遍存在的金腰酮B和金腰酮C(Chrysosplenol B,Chrysosplenol C)都有显著的抗病毒活性。以上生理活性表明金腰属植物值得进一步研究和开发。

染色体是生物体内在的遗传物质基础，是遗传物质的主要载体。染色体大小、数目和形态(即核型特征)在植物的生长发育和世代繁衍过程中相对稳定，不易受环境条件变化的影响产生变异，能在很大程度上反映了物种的特性及其遗传差异。因此，不同物种的染色体核型特征甚至染色体数目可为本属植物分类、系统发育和亲缘关系鉴定提供细胞学依据。金腰属植物众多，不同种类黄酮类成分差异较大，因此鉴定清楚并筛选药用价值高的金腰种类是该属植物开发应用的首要任务。当对特定类群细胞内染色体数目、形态和核型等进行比较研究时，供核型分析的的染色体标本必须核型特征完整、清晰。

查阅资料发现目前没有金腰属植物染色体制备的方法，而常规的染色体制片方法，即压片法和去壁低渗法对于大叶金腰染色体制片来说具有许多问题，如染色体难以分散、伸展不充分，细胞质残留较多，染色不够明显，制片结果不稳定等。因此，获得一种适用于大叶金腰染色体核型分析制片的方法是目前急需解决的问题。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明旨在于提供一种适用于大叶金腰染色体核型分析制片的方法，为大叶金腰的后续科学研究提供帮助，为金腰属植物的分类和开发应用研究奠定基础。

在一个实施方式中，本发明提供了一种简单适用的大叶金腰染色体核型制备的方法。具体步骤为: