[发明专利]快速检测水中大肠埃希氏菌的方法

说明书

本发明提出了用于检测水中大肠埃希氏菌的引物组，所述引物组包括：SEQ ID NO：1～6所示的核苷酸序列。利用本发明的引物组检测水中大肠埃希氏菌具有特异性强、准确性高、灵敏度强、操作简便、成本低等优点，适于广泛应用。

技术领域

本发明涉及水质检测领域。具体地，本发明涉及快速检测水中大肠埃希氏菌的方法。更具体地，本发明涉及用于检测水中大肠埃希氏菌的引物组、试剂盒以及检测水中大肠埃希氏菌的方法。

背景技术

水资源安全利用过程中对水质进行检测控制是一项重要的工作，其中病原微生物是水质检测最为关注的问题之一。水体中的病原微生物主要来自人畜粪便，经饮食、呼吸、皮肤接触等途径感染人类，最终引起肠道疾病或呼吸道疾病的发生。水中病原微生物污染对人类健康构成了潜在威胁，因此对其进行检测与控制十分必要。

水中病原菌造成的发病率和死亡率是较高的，同时这又是一种可防可控的危害。因此，水中病原菌的有效检测是防控相关疾病爆发的重要举措。我国现行的水质标准主要采用指示微生物大肠菌群来评估病原微生物危害程度。大肠菌群是一种常见的指示微生物，一般认为该菌群细菌包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。其中，大肠埃希氏菌是大肠菌群中的主要细菌。目前，国家标准(GB4789.3-2016)中采用大肠菌群计数的两种方法为MPN法和平板计数法。这两种方法都需要进行细菌培养，存在操作复杂、费时、费力等缺点。

因此，目前针对水中大肠埃希氏菌的检测方法仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。本发明提出了一种用于检测水中大肠埃希氏菌的引物组、试剂盒和方法，具有特异性强、准确性高、灵敏度强、操作简便、成本低等优点，适于广泛应用。

在本发明的一个方面，本发明提出了一种用于检测水中大肠埃希氏菌的引物组。根据本发明的实施例，所述引物组包括：SEQ ID NO：1～6所示的核苷酸序列。发明人对大肠埃希氏菌的总DNA序列进行研究发现，污水中的大肠埃希氏菌普遍存在β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidas)，进而，通过对该酶进行基因检测，可以准确地判断出水中是否存在大肠埃希氏菌。进一步地，针对污水中大肠埃希氏菌的总DNA进行研究分析，获得了下述3对引物，利用其可以特异性地扩增出β-葡萄糖醛酸苷酶。由此，利用根据本发明实施例的引物组可以特异性地检测水中是否存在大肠埃希氏菌，并且具有检测结果准确性强、灵敏度高、操作简便、成本低等优点，适于广泛应用。

表1引物序列

在本发明的另一方面，本发明提出了一种检测水中大肠埃希氏菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：提取水中的总DNA；利用前面所述引物组分别对所述总DNA和超纯水进行扩增，以便得到样品产物和对照产物；将所述样品产物与对照产物进行比对，以便确定所述水中是否存在大肠埃希氏菌。如前所述，该引物可以特异性扩增大肠埃希氏菌上的β-葡萄糖醛酸苷酶，进而可以特异性地扩增出β-葡萄糖醛酸苷酶。由此，利用根据本发明实施例的方法具有检测结果准确性强、灵敏度高、操作简便、成本低等优点，适于广泛应用。

根据本发明的实施例，上述检测水中大肠埃希氏菌的方法还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述扩增是采用环介导等温扩增方式进行的。与常规PCR相比，环介导等温扩增技术不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，反应产物可以进行简单低成本的检测，例如通过观察浊度、凝胶电泳和荧光染料法进行鉴别。

根据本发明的实施例，所述比对是通过下列方式进行的：以SYBR Green I染料对所述样品产物和对照产物进行染色；所述样品产物染色后呈绿色，对照产物染色后呈橙红色，是所述水中存在大肠埃希氏菌的指示；所述样品产物和对照产物染色均呈橙红色，是所述水中不存在大肠埃希氏菌的指示。由此，可以准确、方便地测定水中是否存在大肠埃希氏菌。