[发明专利]一种检测半胱氨酸的方法

说明书

本发明涉及一种检测半胱氨酸的方法，将金纳米三角片溶液与一系列不同浓度的半胱氨酸溶液混合，然后加入pH3.5‑5.5的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液、TMB溶液和双氧水,在10‑50℃培育5‑30min后，检测在652nm处的吸收值，建立半胱氨酸浓度‑吸收值标准曲线；然后将金纳米三角片溶液与待测样混合，加入pH3.5‑5.5的醋酸‑醋酸钠缓冲溶液、TMB溶液和双氧水,在10‑50℃培育5‑30min后，检测在652nm处的吸收值，并与半胱氨酸浓度‑吸收值标准曲线比对，得到待测样中的半胱氨酸浓度。该方法无需对样品进行修饰，检测过程简便、快捷，且选择性高，适用于血清等生物样品中半胱氨酸浓度的检测。

技术领域

本发明涉及一种快速检测半胱氨酸的方法，属于化学检测技术领域。

背景技术

半胱氨酸是人体内一种重要的含巯基氨基酸，在人的生理和病理过程中扮演着十分重要的角色，它能够调节生物体内蛋白质的活性并在细胞内抗氧化性防御体系中起到了至关重要的作用。生命体内半胱氨酸含量的高低可以为一些疾病的诊断提供科学的依据。例如，体内半胱氨酸含量的减小将会导致婴儿生长缓慢，肺功能障碍等；而较高的半胱氨酸含量则与一些癌症以及心血管疾病的产生密切相关，异常的半胱氨酸含量还可能引起艾滋病，老年痴呆症，帕金森病和肾功能衰竭等等。因此，半胱氨酸的定量检测非常有意义，也一直以来就是人们研究的热点。

现有技术中关于半胱氨酸的检测方法，主要包括酶循环法、高效液相色谱法、荧光法等，但这些方法或多或少存在一些不足，比如，仪器昂贵，操作繁琐，需要的时间长等，使其在实际应用中受到限制，电化学分析方法虽然准确度高，测量范围宽，仪器设备较简单，成本低，但选择性差，不能有效的区分抗坏血酸(AA)、尿酸(UA)等对半胱氨酸的干扰。因此，非常有必要发展一种简单、快速的检测半胱氨酸的方法。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中半胱氨酸检测方法存在的不足，提供一种检测半胱氨酸的方法，该方法无需对样品进行修饰，检测过程简便、快捷，速度快，且选择性高。

技术方案

一种检测半胱氨酸的方法，包括如下步骤：

(1)将金纳米三角片溶液与一系列不同浓度的半胱氨酸溶液混合，然后加入pH为3.5-5.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液和双氧水,将所得混合体系在10-50℃培育5-30min后，用紫外分光光谱仪检测在652nm处的吸收值，建立半胱氨酸浓度-吸收值标准曲线；

(2)将金纳米三角片溶液与待测样品混合，然后加入pH为3.5-5.5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液、3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液和双氧水,将所得混合体系在10-50℃培育5-30min 后，用紫外分光光谱仪检测在652nm处的吸收值，并与步骤(1)中的半胱氨酸浓度-吸收值标准曲线比对，从而得到待测样品中的半胱氨酸浓度。

进一步，步骤(1)和(2)中，所述金纳米三角片溶液的制备方法：往试管中依次加入800μL 0.1M的十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)溶液、4mLH₂O、40μL 25.4mM的HAuCl₄溶液、37μL0.01M的KI溶液、10μL 0.1M的NaOH溶液,摇匀后静置10min，得生长液，往生长液中加入50μL64mM的抗坏血酸溶液和2.5μL 0.1M的NaOH溶液，摇匀后静置15min，得到金纳米三角片溶液。

进一步，步骤(1)和(2)中，所述醋酸-醋酸钠缓冲溶液的浓度为0.05M，pH为4.2。

进一步，步骤(1)和(2)中，所述3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液浓度为10-15mM。

进一步，步骤(1)和(2)中，所述双氧水浓度为1-1.5M。

进一步，步骤(1)和步骤(2)中，培育温度为40℃，培育时间为10min。