[发明专利]基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种基于间充质干细胞外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，其特征在于，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到；其中，以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20‑30份、泊洛沙姆407 10‑15份、泊洛沙姆188 5‑10份、高分子调节剂0.3‑1份、天然高分子巯基化衍生物0.4‑1份、保湿剂0.4‑0.8份和水44‑63份；所述凝胶原液的pH为5‑6；所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液。

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂的制备方法。

背景技术

间充质干细胞(MSC)是一种成体干细胞。MSC可以从骨髓、脂肪组织、肺、肝、脾、胎盘羊水、脐血脐带等多种组织中分离培养获得。他们具有自我更新能力、组织修复和免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如分化为成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞等。还能向其他胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞和血管内皮细胞分化。由于MSC易于分离、扩增，有独特的免疫表型和免疫调节的能力，因此被广泛应用于组织修复、组织工程和器官移植免疫治疗等方面。

MSC来源的外泌体是活细胞分泌的膜性囊泡，直径约30～100nm，内含蛋白质、mRNA、microRNA等，可在细胞间进行物质传递，其疗效类似于MSC的功能，对缺血性心脏病、肾损伤、肺损伤和肿瘤血管生成均有修复作用。如MSC来源的外泌体在肾脏损伤动物模型中可促进肾脏修复；在大肠杆菌诱导的肺损伤小鼠模型中，MSC来源的外泌体通过调控角质细胞生长因子mRNA水平，促进肺上皮修复。在肝纤维化的疾病模型中，MSC来源的外泌体主要抑制EMT减轻肝纤维化程度。外泌体可获得与MSC输注类似的疗效，避免了干细胞治疗带来的风险，为临床患者提供了治疗新策略。

公开号为CN101338036A的中国专利公开了一种生物相容快速凝胶化水凝胶及其喷雾剂的制备方法，虽然其可以快速凝胶化，但是水凝胶的载药性以及对于伤口的愈合效果有待提高。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种基于间充质干细胞外泌体的水凝胶及其喷雾剂的制备方法，用于伤口修复时，凝胶原液和快速凝胶化反应溶液喷洒在伤口表面后迅速反应形成水凝胶，本发明的水凝胶可缓慢释放间充质干细胞外泌体，提高外泌体在创伤表面的驻留时间，本发明为伤口的修复愈合提供安全、有效、应用方便的制剂。

本发明提供了一种基于间充质干细胞(MSC)外泌体的快速凝胶化水凝胶的制备方法，水凝胶由凝胶原液和快速凝胶化反应溶液发生交联反应后得到，反应温度为15-25℃；其中，

以重量为基准，所述凝胶原液包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体提取液20-30份、泊洛沙姆407(P407)10-15份、泊洛沙姆188(P188)5-10份、高分子调节剂0.3-1份、天然高分子巯基化衍生物0.4-1份、保湿剂0.4-0.8份和水44-63份；所述凝胶原液的pH为5-6；

所述快速凝胶化反应溶液为二硫代联吡啶类巯基反应活性交联剂的水溶液；所述快速凝胶化反应溶液的pH为4-5。

进一步地，间充质干细胞外泌体提取液的浓度为1000-3000μg/L；间充质干细胞外泌体来源于脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞中的一种。本发明利用MSC来源的外泌体具有抑制细胞损伤、诱导组织细胞增殖、促进组织修复的特性，制备出一种用于伤口修复的MSC外泌体快速凝胶化水凝胶，可以应用于修复各种原因引起的伤口。通过设置特定比例的泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的配伍，使本发明的凝胶原液常温下为低粘度的液态，便于应用。

进一步地，间充质干细胞外泌体提取液的制备方法包括以下步骤：

采用无饲养层培养法，在无血清培养体系中培养间充质干细胞，收集纯化培养液中的外泌体，即为间充质干细胞外泌体提取液。