[发明专利]一种调控褐飞虱翅型的Dnmt3基因的dsRNA序列及其应用

说明书

本发明提供一种调控褐飞虱翅型的Dnmt3基因的dsRNA序列及其应用。通过RNA干扰技术，注射本发明的dsRNA干扰褐飞虱的Dnmt3基因后，可对褐飞虱的翅型进行人工调控。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种调控褐飞虱翅型的Dnmt3基因的dsRNA序列及其应用。

背景技术

褐飞虱(Nilaparvata lugens)属于半翅目(Hemiptera)蝉亚目(Cicadomorpha)蜡蝉总科(Fulgoroidea)飞虱科(Delphacidae)害虫。褐飞虱食性单一，只能在水稻上取食和繁殖，是影响水稻生长发育的主要害虫之一。水稻作为我国居民生活的主粮之一，危害情况与我国的粮食安全息息相关。褐飞虱一旦暴发成灾，便会对水稻生产造成严重损失。目前，在褐飞虱的防治工作中，仍以化学防治为主。但随着各类化学药剂的长期大量使用，褐飞虱也逐渐表现出较高的抗药水平，进一步促使化学药剂的过度使用，造成严重的环境污染，威胁人类的健康和破坏农业生态平衡。因此，在农业生产实践中，急需寻找到一种替代化学防治的方法。

褐飞虱具有长短翅型分化的翅二型现象，短翅型不能飞行，但繁殖能力极强，而长翅型则具有飞行能力，可以远距离迁飞。翅二型现象是褐飞虱在进化过程中对不利环境的一种适应策略。

DNA甲基化，一般指DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，变为5-甲基胞嘧啶，是一种表观遗传学的重要修饰方式。近几年的研究表明，在昆虫中，DNA甲基化通过改变基因的表达方式，可以直接影响昆虫的发育分化。例如，在褐飞虱中，DNAmethyltransferase 3(Dnmt3)基因参与DNA的从头甲基化，对褐飞虱的翅型分化具有一定的调控作用。

本发明利用现有的褐飞虱转录组数据，获得调控翅型分化的DNA甲基化酶基因Dnmt3，并以该基因cDNA为模板，设计引物合成相应的dsRNA。通过dsRNA注射，实现调控褐飞虱后代翅型。

发明内容

本发明的目的提供一种调控褐飞虱翅型分化的DNA甲基化酶基因Dnmt3的dsRNA及其应用，可通过下述技术方案实现：

一种调控褐飞虱翅型的Dnmt3基因的dsRNA，其特征在于，所述dsRNA序列如SEQ IDNo.1所示；

本发明的dsRNA在制备防治褐飞虱药剂中的应用；

一种调控褐飞虱翅型的RNA干扰方法，其特征在于：将本发明的dsRNA通过注射法注入褐飞虱成虫体内；优选地，单头褐飞虱注射dsRNA的量为200ng-500ng。

一种扩增本发明dsRNA的引物，其特征在于，所述引物包含1对引物，其序列如SEQID NO:2-3所示。

本发明有益效果：

本发明的dsRNA对刚羽化2天左右的短翅种群的褐飞虱雌成虫进行RNA干扰，注射dsRNA48小时后，Dnmt3相对表达水平显著下降，同时褐飞虱后代的长翅褐飞虱比例显著增加。

附图说明

图1扩增本发明dsRNA的电泳图

其中，M为Maker，dsDnmt3为本发明扩增的dsRNA。

图2褐飞虱注射dsRNA后Dnmt3基因的表达量图。

图3注射dsRNA后的褐飞虱的后代长翅比例图。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1