[发明专利]一种牛樟芝发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法

权利要求书

1.一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，包括如下步骤：

(1)菌种的扩大培养：通过挖块接种的方式将牛樟芝菌接种至新固体培养基中，进行扩大培养，直至新牛樟芝菌落的形成；

(2)孢子悬液的制备：将无菌水倒入新固体培养基中，用玻璃棒刮下孢子，得到孢子悬液；

(3)牛樟芝液体种子培养：将孢子悬液接种至液体种子培养基中，通过控制培养基组成和培养条件，形成规则小球状菌体即为液体种子；

(4)牛樟芝液体发酵培养：将步骤(3)中的液体种子接入液体发酵培养基中，150-180rpm，25-28℃，发酵培养第8-10d时，加入吐温80；发酵培养第14-17d时，加入油酸；继续发酵至20d；

(5)产物提取：发酵结束后，将发酵液离心，收集上层有机相，用乙醇提取发酵液有机相中的目标活性物质4-Acetylantroquinonol B。

2.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(1)中固体培养基组成为：葡萄糖15-30g/L，蛋白胨1-5g/L，麦芽浸粉15-30g/L，琼脂20-35g/L。

3.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(2)中孢子悬液中孢子数含量为10⁶-10⁷个/mL。

4.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(3)中液体种子培养基组成为：葡萄糖10-30g/L，蛋白胨5-15g/L，KH₂PO₄0.5-2g/L，MgS0₄·7H₂O 0.5-1.0g/L。

5.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(4)中液体发酵培养基组成为:葡萄糖25-45g/L，蛋白胨5-10g/L，K₂HPO₄0.5-1.0g/L，MgS0₄·7H₂O 0.1-1.0g/L；117℃灭菌25min。

6.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(4)中液体种子的接种量为10％-30％v/v。

7.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(4)中加入吐温80量为1％-3％v/v。

8.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述步骤(4)中加入油酸量为20％-50％v/v。

9.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，所述牛樟芝菌为Antrodia camphorate BCRC Number：35396或Antrodiacinnamomea BCRC Number:35398或Taiwanofungus camphorates CGMCC Number:5.906。

10.如权利要求1所述的一种发酵耦合萃取生产4-Acetylantroquinonol B的方法，其特征在于，利用高效液相色谱配合紫外检测对所述步骤(5)提取得到的目标活性物质4-Acetylantroquinonol B进行测定。