[发明专利]中性氨基酸作为细胞低温保护剂的使用方法及其应用

说明书

本发明公开了一种中性氨基酸作为细胞低温保护剂的使用方法及其应用，使用方法包括：将中性氨基酸均匀分散在等渗溶液中，经滤膜过膜，得到低温保存液，在低温保存液中加入细胞，混合均匀后得到细胞保存液，置于超低温保存，其中，所述中性氨基酸为β‑丙氨酸、γ‑氨基丁酸或ε‑氨基己酸。本发明的中性氨基酸作为细胞低温保护剂不仅具有良好的生物相容性，对无核哺乳动物细胞和有核哺乳动物细胞具有非常高的超低温保存效率，且能快速地从冻融后的细胞中去除。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种中性氨基酸作为细胞低温保护剂的使用方法及其应用。

背景技术

随着以细胞为基础的医学技术(如细胞治疗、组织工程和输血医学)的快速发展，活细胞的保存与运输成为目前的研究热点。当细胞在体外未被有效保存时，其会失去功能和活性，进而影响临床治疗效果。同时，供体志愿者与受体病人常常不在同一地区且供体志愿者捐献细胞的时间与受体病人接受细胞移植的时间不吻合。超低温保存技术是解决该问题的常用方法。它可以将细胞冷冻至-196℃，使其处于‘休眠’状态，从而长期保存细胞并实现细胞的跨地区运输。但是，在超低温保存过程中，冰晶的形成与生长会给细胞带来致命性的渗透压损伤和机械损伤。为了解决这个问题，科研人员致力于开发细胞低温保护剂以使细胞免受低温损伤。

为了满足超低温保存后的细胞在临床中的应用需求，细胞低温保护剂需要具备来源易得，良好的生物相容性，保存效率高以及可快速从细胞中去除的优点。但是集以上多重优点于一身的低温保护剂还鲜有报道，这制约了超低温保存技术在临床中的应用。目前，二甲基亚砜(DMSO)和甘油是目前使用最广泛的低温保护剂。但是，二者具有细胞毒性。研究表明，DMSO可通过干扰细胞代谢、酶活性、细胞周期等影响细胞的生长和功能，甚至导致细胞死亡。在细胞治疗中，使用DMSO冷冻保存过的细胞可能会引起病人诸多的临床副反应，如过敏、胃肠不适等。同时，DMSO和甘油会引起血管内溶血。在冷冻复苏后，科研人员需要经过复杂的洗脱程序去除细胞内的DMSO和甘油，费时费力，不利于临床操作。因此开发新型细胞低温保护剂，使其同时具备良好的生物相容性，高保存效率以及可快速从细胞中去除具有十分重要的意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中性氨基酸作为细胞低温保护剂的使用方法；

本发明的另一目的是提供一种中性氨基酸作为细胞低温保护剂的应用，该中性氨基酸为β-丙氨酸(β-Ala)、γ-氨基丁酸(GABA)或ε-氨基己酸(ε-Ahx)，当中性氨基酸作为细胞低温保护剂使用时，该细胞低温保护剂不仅具有良好的生物相容性，对无核哺乳动物细胞(如绵羊红细胞和新西兰兔红细胞)和有核哺乳动物细胞(如人肺癌细胞-GLC-82，人宫颈癌细胞-Hela细胞和人平滑肌细胞SMCs)具有非常高的超低温保存效率，且能快速地从冻融后的细胞中去除。

本发明的目的是通过下述技术方案予以实现的。

一种中性氨基酸作为细胞低温保护剂的应用，所述中性氨基酸为β-丙氨酸、γ-氨基丁酸或ε-氨基己酸。

在上述技术方案中，所述细胞为无核细胞或有核细胞。

在上述技术方案中，将所述中性氨基酸均匀分散在等渗溶液中，经滤膜过膜，得到低温保存液。

在上述技术方案中，在低温保存液中加入细胞，混合均匀后得到细胞保存液，置于超低温保存。

在上述技术方案中，所述超低温为-196～-20℃。

在上述技术方案中，所述滤膜的孔径小于等于0.22微米，用于过滤细菌。

在上述技术方案中，所述等渗溶液为PBS水溶液、生理盐水或细胞培养基。