[发明专利]一种发光报告系统及其在抗生素发现筛选中的应用

权利要求书

1.一种利用发光报告系统发现筛选抗生素的方法；其中所述发光报告系统由分子伴侣基因clpX、groE、dnaJ、dnaK的启动子片段和与分子伴侣基因启动子相连的luxABCDE基因片段构建而成；发现筛选抗生素的方法是：将发光报告系统中的四种质粒pAmilux-clpX-luxABCDE质粒、pAmilux-dnaJ-luxABCDE质粒、pAmilux-dnaK-luxABCDE质粒、pAmilux-groE-luxABCDE质粒分别转化入金黄色葡萄球菌中，制成四株金黄色葡萄球菌lux报告株，分别命名为：报告菌株S1、报告菌株S2、报告菌株S3、报告菌株S4，并制备含有各报告菌株的琼脂糖双层平板，将灭菌的滤纸片在琼脂糖双层平板中央或培养基表面有序排布并与培养基紧密相贴；然后将含有待筛选药物或怀疑含有抗生素的溶液滴加到滤纸片上，继续培养并观察有无细菌发光产生，若有至少一株报告菌株发光即确定被检测物含有抗生素；其中，所述滤纸片是用打孔器将新华1号定性滤纸打成直径6mm的圆形小纸片；所述含有待筛选药物或怀疑含有抗生素的溶液滴加量是1～1.5μl；所述将含有待筛选药物或怀疑含有抗生素的溶液滴加到滤纸片上以后，将平板倒置于培养箱中，37℃培养20～25h；

其特征在于：

所述pAmilux-clpX-luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述pAmilux-dnaJ-luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述pAmilux-dnaK-luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述pAmilux-groE-luxABCDE质粒的核苷酸序列如SEQID NO：4所示；

所述发现筛选抗生素的种类是：达托霉素(DAP)，多粘菌素B(PMB)，亚胺培南(IPM)，青霉素G(PEN)，万古霉素(VAN)，红霉素(ERY)，卡那霉素(KAN)，壮观霉素(SPE)，链霉素(STR)，四环素(TET)，丝裂霉素C(MMC)，环丙沙星(CIP)，加替沙星(GAT)，甲氧苄啶(TMP)，利福平(RIF)，腐草霉素(PHL)十六种抗生素。