[发明专利]与阿片类物质依赖相关的TH基因SNP位点的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种与阿片类物质依赖相关的TH基因SNP位点的检测方法及其应用，本发明根据TH基因SNP位点rs10770140多态性与阿片类物质依赖(OD)的相关性，设计了用于扩增TH基因多态性位点所在序列片段的特异引物，并提供了包含该引物的SNP分型检测试剂盒及分型检测方法。本发明能够对rs10770140位点进行基因分型，方法简便、快速，结果准确、明了，为OD易感性鉴定提供了一个新的途径。

技术领域

本发明属于基因检测与分析领域，涉及与阿片类物质依赖(opioids dependence，OD)易感性相关的酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)基因单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism,SNP)位点rs10770140的分型检测及其应用。

背景技术

药物依赖是一种以强迫觅药及对药物持续渴求为特点的慢性复发性脑疾病，对个人和社会造成严重危害。阿片类物质是从罂粟植物中提取的生物碱及衍生物，其中，吗啡是目前临床上最有效的镇痛药，临床中晚期癌症患者使用吗啡镇痛的人数每年以1300万左右的数量增长，但因其显著依赖性和耐受性，临床应用受到诸多限制，而阿片类处方药也成为非医疗性药物滥用的首要目标，最近三年美国正遭受日益严重的阿片药物滥用危机。因此，鉴别阿片类物质依赖的易感人群对于临床阿片类镇痛药合理使用具有非常重要的意义。

关于药物依赖的脑神经生物学机制目前尚不十分清楚，但有大量证据证实阿片类药物依赖存在显著的遗传因素，是基因遗传易感性与环境影响共同作用的结果。近年来，关于基因多态性在药物依赖中的作用受到越来越多的关注。基因多态性是指同一种群内个体与个体间基因核苷酸序列存在的差异性，即在一个随机婚配的生物群体中染色体同一基因位点上存在两种以上不连续的基因型，基因多态性所致编码的相应氨基酸改变可决定个体对疾病的易感性及表型差异。

阿片类物质依赖的产生与脑内多巴胺奖赏系统密切相关，而单胺能神经递质系统的相关基因对奖赏系统具有重要的调控作用，故这类基因成为研究阿片类物质依赖的重要候选基因。酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)是多巴胺及其他儿茶酚胺类神经递质合成的起始酶及限速酶，决定着多巴胺以及儿茶酚胺合成的速率，在哺乳类动物中枢神经系统及周围神经系统中发挥着重要作用。现阶段有关TH基因在神经系统上的研究主要集中于高血压、帕金森、躁郁症以及精神分裂症的形成机制上，而关于TH基因与药物依赖特别是阿片类物质依赖的相关研究却鲜有报道。

迄今，随着高通量、高精准度DNA研究技术的不断发展，与药物成瘾相关的分子遗传机制研究也快速发展，不断有研究报道新的候选基因；目前对TH基因内rs10770140位点的多态性的研究只见于高血压形成机制的相关报道中，而rs10770140位点与阿片类物质依赖的关系目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与阿片类物质依赖相关的TH基因SNP位点的检测方法及其应用。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种与阿片类物质依赖相关的TH基因SNP位点的检测方法，包括以下步骤：

以待测个体(例如，受试人)基因组DNA为模板，PCR扩增TH基因片段，对扩增得到的片段进行测序，根据测序结果确定TH基因SNP位点rs10770140的等位基因类型或基因型。

优选的，所述基因组DNA提取自体液(如血液、腹水和尿液)、组织细胞(如肝脏组织、皮肤组织、肌肉组织)、毛发等生物样品。