[发明专利]一种可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明提供了一种可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白及其制备方法与应用，涉及生物工程领域和血液净化技术、通过重组基因技术高效表达与IgE有高结合力的受体蛋白FcεRIα‑D1‑D2，将其作为血液吸附剂的配基，固定于固相载体上制备得到的吸附剂可用于去除过敏反应病人血液中过量的IgE，治疗重症的过敏性疾病。

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种可溶性人IgE受体蛋白截短蛋白的制备方法及应用。

背景技术

过敏性疾病在全世界范围内呈逐年增加的趋势，在近30年间发病率至少增加了3倍，预计在今后的20年内，工业化国家50％的人口将染上过敏症。过敏性疾病发生的机理是IgE介导的免疫变态反应，常见疾病有：过敏性哮喘、季节性过敏性鼻炎、特应性皮炎、药物性间质性肺炎、支气管肺曲菌病、麻风、类天疱疮及某些寄生虫感染等。过敏性疾病是人体内IgE与受体蛋白(FcεR)的结合导致的一系列免疫变态反应。FcεR位于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面，也存在于人体单核细胞、巨噬细胞和血小板上，可分为FcεRI和FcεRII两类。FcεRI表达于肥大细胞及嗜酸性粒细胞表面，是IgE的高亲和力受体(Kd＝l0^-9-10^-10M)。FcεRII也称作CD23，是IgE低亲和力受体(Kd＝l0^-5M)。通过表达重组的高亲和力受体蛋白，并将其偶联至固相载体合成免疫吸附剂，通过体外循环快速清除体内的IgE能够达到有效控制病情的目的。

目前治疗过敏性疾病比较有效的方法有：1)药物治疗如奥马珠单抗。奥马珠单抗是人源化的抗IgE抗体，用量大，生产成本高，患者的经济压力大。且药物治疗有一定的局限性，对于重症过敏患者，体内IgE水平可达500-10000IU以上，甚至达到10万IU以上(SilvanaBalzar,MD1等，2007；M.Carlsson等，2015)，单抗药物用量非常大。Omalizumab药剂量主要依据患者的体重及IgE的起始水平，最低用量为2700mg-5400mg(Philip J.Lowe，2009)，药物引起的其它副作用会明显加大，且价格昂贵，每年的治疗费用达10万元以上。2)血液净化治疗法。血液净化疗法是通过体外循环的方法，用血浆分离器分离出病人的血浆，通过吸附剂吸附清除机体内的目标物质。目前商品化的产品有德国美天旎公司开发的第一代Ig吸附产品Therasorb-Ig Adsorber，配基是多克隆羊抗人免疫球蛋白抗体。2015年，Daeschlein等人报道了另一项采用Ig-Therasorb吸附器重复进行免疫吸附(IA)治疗高血清IgE水平的重症过敏性皮炎患者的临床研究，结果显示免疫吸附对重症过敏性皮炎具有较好的疗效。美天旎的二代吸附柱Therasorb-IgE Adsorber以鼠单抗为配基，对过敏性皮炎病人血清IgE水平在每个疗程的降低水平达92％。德国费森尤斯IgE Adsorber(IgEnio)是单链抗体，该产品单次吸附治疗的IgE下降率为79％。C.Lupinek等人报道称IgEnio能在奥玛珠单抗存在的情况下吸附IgE。说明体外吸附IgE能够有效控制病情。但是上述产品存在一些缺点：如美天旎的产品羊抗和鼠抗含外源蛋白，安全性差。费森尤斯的单链抗体吸附能力弱，是将鼠源的单抗可变区VH和VL重组得到的抗体，在大肠杆菌表达。

本发明用受体蛋白截短蛋白作为配基合成吸附剂，由于受体蛋白是人体内已存在的蛋白，安全性好，不存在外源哺乳动物蛋白带来的免疫反应。截短蛋白用原核大肠杆菌进行表达，工艺简单，生产成本低，更易于大规模使用。因合成吸附剂的蛋白用量非常大，表达纯化大量的受体蛋白是首要任务。