[发明专利]一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述SERS检测试剂盒包括固相SERS基片、第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂，所述固相SERS基片是表面沉积有银纳米棒阵列的玻璃片，所述第一试剂包含L1-L2-C1结构，所述L1-L2-C1结构包括能与登革病毒基因片段碱基序列完全互补的发夹型结构C1、与C1部分互补的L1、以及能与L1部分碱基互补的修饰有巯基的L2，L1与L2形成L1-L2双链，L1-L2双链与C1杂交形成L1-L2-C1结构；所述第二试剂为修饰有染料分子的发夹型结构C2，所述第三试剂为修饰有染料分子的发夹型结构H1，所述第四试剂为修饰有染料分子的发夹型结构H2，其中发夹型结构H1能被C1-C2双链中的C2部分碱基打开，H2能被H1部分碱基序列打开，且H2另一部分碱基序列能打开另一发夹型结构H1，从而形成交替杂交的长的H1-H2双链，所述C1碱基序列如SEQ ID NO：2所示，所述L1的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，所述L2碱基序列如SEQ ID NO：4所示；所述C2碱基序列如SEQ ID NO：5所示；所述H1的碱基序列如SEQ ID NO：6所示，所述H2碱基序列如SEQ ID NO：7所示。

2.根据权利要求1所述的登革病毒基因片段SERS检测试剂盒，其特征在于，所述SERS检测试剂盒还包括第五试剂巯基己醇。

3.根据权利要求1~2任一项所述的登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）固相SERS基片的制备；

2）第一试剂的获得：根据登革病毒基因片段设计并合成对应的发夹型结构C1，再根据所述C1设计并合成对应的L1，再根据L1设计并合成L2；

3）第二试剂的获得：根据C1设计并合成发夹型结构C2；

4）第三试剂的获得：根据所述C2设计并合成对应的发夹型结构H1；

5）第四试剂的获得：根据H1设计并合成发夹型结构H2。

4.根据权利要求3所述的登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述C1、L1、L2、C2、H1和H2浓度相同，浓度均为1-10 µM。

5.权利要求1~2任一项所述的登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其不用于疾病的诊断和治疗，其特征在于，包括以下步骤：

1）用超纯水多次清洗试剂盒中的固相SERS基片；

2）向试剂盒的第一试剂中加入检测样品与第二试剂共培养；

3）向步骤2）中加入第三试剂与第四试剂得到溶液；

4）将步骤1）得到的固相SERS基片与步骤3）的溶液共培育；

5）缓冲液冲洗步骤4）得到的基片后，用第五试剂封闭基片表面；

6）纯水冲洗步骤5）得到的基片后，进行SERS检测。

6.根据权利要求5所述的一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤2）中的共培养条件为24-28℃，培养1.5-2h。

7.根据权利要求5所述的一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤3）培养条件为24-28℃，1.5-2h。

8.根据权利要求5所述的一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤4）的培育条件为25-30℃，60%-80%湿度环境，培养3-4h。

9.根据权利要求5所述的一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤5）的培养条件为25-30℃，60%-80%湿度环境，静置培养10-20 min。